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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 胰岛素体内样品处理
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魔鬼加菲

铁虫 (初入文坛)

[求助] 胰岛素体内样品处理 已有1人参与

以下是我在文献中看到的胰岛素体内样品处理方法：
      取10μl血浆样品加入到5mlEP管中，再加入1mlPBS（7.4），加入1ml二氯甲烷萃取，涡旋5min，简单的离心分层，置于干冰浴中，除去上清液，取0.8ml有机层转移至另一EP管，加入130μl 0.05N HCl反萃取有机层，涡旋和离心后，有机层在氮气流下吹干，取100μl等分样品进样。
问题：1.为什么用7.4的PBS？
          2.为什么加130μll 0.05N HCl？
          3.是直接吹有机层吗？吹的程度怎么掌握？
          4.蛋白质是怎么分离的？
          5.二氯甲烷的作用是让胰岛素进入到有机层里吗？
          6.蛋白分离的原理是什么？
各位大神给予指点！！！
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1楼 2014-12-02 19:10:45
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yuecen

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
妈天儿呀，您和小小肥猫是一个人吗？还是一对人儿啊？
胰岛素等电点为5.35-5.45，所以采用PH7.4的磷酸盐缓冲液调节血浆样品至中性，使胰岛素呈分子状态，用二氯甲烷萃取，再用0.05HCL反提至水相。个人认为应该能分开，不妨试试，至于有机层要尽量吹干，那个沸点低好吹干，因为要进样的是水相。吹的程度只要不把溶液吹出来就行了，水相是很难吹干的，所以不用担心啦。蛋白质是变性分离的，分离的原理就是蛋白加盐或酸碱变性啦，亲，中学的化学都还给老师啦？
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2楼2014-12-02 23:17:31
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魔鬼加菲

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuecen at 2014-12-02 23:17:31
妈天儿呀，您和小小肥猫是一个人吗？还是一对人儿啊？
胰岛素等电点为5.35-5.45，所以采用PH7.4的磷酸盐缓冲液调节血浆样品至中性，使胰岛素呈分子状态，用二氯甲烷萃取，再用0.05HCL反提至水相。个人认为应该 ...

她是我师姐！
胰岛素在7.4的时候不应该是负离子状态吗？为什么要反提取到水相里？而且吹干的时候有机层在下层要怎么吹啊？
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3楼2014-12-04 14:07:49
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yuecen

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 魔鬼加菲 at 2014-12-04 14:07:49
她是我师姐！
胰岛素在7.4的时候不应该是负离子状态吗？为什么要反提取到水相里？而且吹干的时候有机层在下层要怎么吹啊？...

给你师姐回复了，呵呵，祝你们好运
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4楼2014-12-04 16:27:26
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yang1hui2

新虫 (小有名气)
你好，请问你们在做胰岛素方面的实验吗？
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5楼2015-01-28 20:24:07
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