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jianqiangli

木虫 (正式写手)

[交流] 色谱峰总有前延,峰形不正

今天做HPLC,样品峰形不正太,起初以为是杂质,用梯度分离,不好使;后来再进一针标准品,发现标准品的峰形依然不好。开始排查原因:
1. 起初流动相加了0.8%冰醋酸, 考虑是否是酸性不够,改为0.8%甲酸,峰形依然没有改变;
2. 考虑是否柱效不行,换了一根柱子;冒险把柱子反冲一次,峰形依然没有改变;
3. 进样阀用甲醇清洗,作用不大;
4. 进针色谱甲醇,用甲醇溶解的样品,看了下吸收度,认为基线基本没有变化;
5. 流动相把甲醇换成乙腈,峰形还是没有变化;
6. 把0.8%冰醋酸流动相,换成纯水峰形还是没有变化;
另外,这根柱子、色谱条件和液相一个月前测这个样品峰形还非常好,最近搬了一次校区再用就不好了,非常奇怪。
明天,把这根柱子换到另一台液相上再试试,再认真清理下进样阀,看看结果吧,实验太揪心!!!
跟大家请教下还有什么方面没有注意到,需要处理下???

色谱峰总有前延,峰形不正
标准品的色谱峰.jpg


色谱峰总有前延,峰形不正-1
色谱甲醇进样色谱峰.jpg
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jianqiangli

木虫 (正式写手)

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4楼: Originally posted by feixiaolin at 2014-11-26 21:02:08
1. 从老校区灌水过来
2. 调整进样速度?

如何调整进样速度?

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6楼2014-11-27 06:44:34
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jianqiangli

木虫 (正式写手)

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12楼: Originally posted by 吴鲁东 at 2014-11-27 09:23:04
1.对照品是否不醇,后面怎么还会有个小峰,建议重新配对照品,或者试试把对照品的峰往后拉,看一下能不能跟前面的东西分开
2.色谱柱在搬运过程是否有碰撞,导致色谱柱损坏,影响分析效果

在别的液相上,用这个柱子没有问题,考虑是进样阀的问题,再重要冲洗下管路

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13楼2014-11-27 09:25:20
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jianqiangli

木虫 (正式写手)

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14楼: Originally posted by ashlink at 2014-11-27 11:27:06
建议试一针不加任何样品的纯甲醇

试了,第二个图就是,看吸收度非常小,基线基本没变化

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15楼2014-11-27 12:14:28
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jianqiangli

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19楼: Originally posted by yuecen at 2014-11-27 14:59:26
建议楼主,首先不加色谱柱用两通,加大流速大概4ml/min后5ml/min冲洗仪器,流程是:水,甲醇,乙腈各冲半个小时左右,然后重新配置流动相,注意玻璃仪器的清洁,注意流动相所用到的有机溶剂一定要新开封的,新过滤的 ...

今天用别人的液相,这根柱子峰形很好。回来又换了台检测器发现峰还是不好,应该是仪器污染了,明天用异丙醇冲洗管路

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20楼2014-11-27 18:47:32
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jianqiangli

木虫 (正式写手)

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21楼: Originally posted by 512564 at 2014-11-27 22:42:11
可能是由于纯甲醇溶解样品的原因吧。加些水进去可能会好吧。

同样甲醇溶解的样品,同样的柱子,在别的液相上就没问题,还是管路污染了

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22楼2014-11-28 06:44:30
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jianqiangli

木虫 (正式写手)

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9楼: Originally posted by 晋新南北 at 2014-11-27 08:33:19
流通池有没有污染?样品用流动相溶解。

后来发现确实是没用流动相溶解的原因。当时在其它agilent上做用甲醇溶解出峰也没问题,就把这问题忽略了。waters上做,样品必须得用流动相溶解。很奇怪。

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29楼2014-12-02 07:34:17
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jianqiangli

木虫 (正式写手)

引用回帖:
25楼: Originally posted by voyager88 at 2014-11-28 14:40:01
可能进样量太大,也可能是溶样溶剂对样品溶解能力太强。建议降低进样量,使用流动相溶解样品。你的溶剂峰怎么能那么高呢?是否有东西没有保留住?

后来发现确实是没用流动相溶解的原因。当时在其它agilent上做用甲醇溶解出峰也没问题,就把这问题忽略了。waters上做,样品必须得用流动相溶解。很奇怪。

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30楼2014-12-02 07:34:46
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jianqiangli

木虫 (正式写手)

引用回帖:
19楼: Originally posted by yuecen at 2014-11-27 14:59:26
建议楼主,首先不加色谱柱用两通,加大流速大概4ml/min后5ml/min冲洗仪器,流程是:水,甲醇,乙腈各冲半个小时左右,然后重新配置流动相,注意玻璃仪器的清洁,注意流动相所用到的有机溶剂一定要新开封的,新过滤的 ...

后来发现确实是没用流动相溶解的原因。当时在其它agilent上做用甲醇溶解出峰也没问题,就把这问题忽略了。waters上做,样品必须得用流动相溶解。很奇怪。

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31楼2014-12-02 07:35:17
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