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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物设计
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xlx906047684

金虫 (著名写手)

[求助] 引物设计 已有7人参与

导师按照文献给我设计了两对引物，但PCR的结果和文献完全不一样，文献上得到的是1100bp左右的条带，我得到得的是300bp左右的条带，而且提DNA和PCR都重复做了，结果一样，导师说要重新设计引物，但我不知道怎么在NCBI上找到该物种中发现的所有这个基因相关序列，也不知道该怎么设计引物，本人是跨专业做分子，所以好多东西还不太懂，希望大家能帮帮忙
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1楼 2014-11-24 19:39:12
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gufeng2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by xlx906047684 at 2014-11-26 12:31:42
不是说3端最好不是A吗（不好意思金币发完了，只能赞一下了，谢谢啊）...

有这原则，但主要看引物和多聚酶的亲和力，你的序列GC含量高，所以PCR条件要选用高GC的。
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19楼2014-11-26 14:18:01
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zhenxiangkai

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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xlx906047684: 金币+2, ★有帮助 2014-11-25 20:33:08
引物设计其实很简单，就是要你基因的两端，5-3端，我们只要把5端的20个左右就可以了，当然，需要的时候可以加些酶切位点，保护碱基之类的，很简单的。主要我做的是做普通的那种
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2楼2014-11-25 08:30:50
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意萧02

木虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-11-25 13:11:02
就说说而已，怎么帮，序列都没有，跟没说一样
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3楼2014-11-25 09:57:59
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意萧02

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
xlx906047684: 金币+2, ★有帮助 2014-11-25 20:52:13
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhenxiangkai at 2014-11-25 08:30:50
引物设计其实很简单，就是要你基因的两端，5-3端，我们只要把5端的20个左右就可以了，当然，需要的时候可以加些酶切位点，保护碱基之类的，很简单的。主要我做的是做普通的那种

5'端就是个定位定点作用，关键是3‘端的设计好吗？
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4楼2014-11-25 09:59:43
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