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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 农杆菌菌液PCR前菌液处理用的溶菌酶浓度要多少合适
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

[求助] 农杆菌菌液PCR前菌液处理用的溶菌酶浓度要多少合适 已有4人参与

我现在要做农杆菌的菌液PCR，由于细胞壁太厚要先用溶菌酶处理一下，浓度多少比较合适，处理温度和时间应该是多少
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1楼 2014-11-13 09:44:17
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xfxycy3090

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直接用把农杆菌煮沸，取上清就可以啦
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2楼2014-11-13 10:23:26
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Neo2000

木虫 (著名写手)

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不用处理，直接PCR就好

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3楼2014-11-13 11:04:21
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-13 11:04:21
不用处理，直接PCR就好

那PCR的程序需要怎么设计啊，预变性时间要多久
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4楼2014-11-13 14:32:32
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Neo2000

木虫 (著名写手)

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引用回帖:
4楼: Originally posted by 蓝色泡沫321 at 2014-11-13 14:32:32
那PCR的程序需要怎么设计啊，预变性时间要多久...

按大肠杆菌的整就好，没什么特别的

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5楼2014-11-13 17:48:18
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

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95℃预变性时间延长到10min，然后按正常PCR进行即可！
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6楼2014-11-14 13:49:43
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快乐农夫

木虫 (正式写手)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-14 14:11:19
正常PCR就行，不用什么溶菌酶也不用加什么变性时间，平时怎么做就怎么做，把农杆菌当普通模板就行，94度的温度比任何溶菌酶都来的有效

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7楼2014-11-14 13:59:11
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