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liuzm021

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞不明原因死亡 已有1人参与

本人细胞室因实验室水管爆裂,进过一次水,之后细胞就一直养不好。怀疑是进水后细胞室污染所致,随后细胞室用过氧乙酸进行熏蒸,接着用新洁尔灭擦拭地板,酒精擦拭超净台及培养箱等。过氧乙酸气味基本散去后开始重新养细胞。但依旧没有明显改善。实验室养的所有细胞的现象基本都一致,包括A549、4T1、B16、HepG2等癌细胞以及一株皮肤干细胞。目前细胞的生长情况如下:细胞生长速度普遍比以前来得慢,培养液颜色较清澈,培养液中的漂浮的死细胞相对以前来讲会多一些,但细胞还能生长。细胞传代需要较大的传代密度,否则细胞很难长起来。
      另外,细胞必须每天都换液,一天不换液的话,细胞马上就死亡(细胞呈球状飘起,边缘很多尖刺,应该是凋亡细胞,而培养液颜色基本上没变成黄色;另一种现象是细胞飘起后个头明显变小,好像都皱起来了一样,细胞数量似乎变少了很多,培养液颜色也基本没变)。
      呈梭状的干细胞频繁换液可保证生长,但有时候贴壁的细胞个体缩小了很多,这时候细胞就长的更慢了。前几代的细胞贴壁后细胞周围也还算清澈,没有什么细胞碎片或细胞泄漏物质;但是到了后面,培养液中会出现比较多的黑色的物质(可能是细胞死亡后聚集团块),飘在培养液中,而另一端与细胞壁连接,不太容易被PBS洗掉。这种黑色团块越多细胞就长得越慢。

请各位战友帮忙诊断一下是什么原因,是不是一种污染,还是其他原因?需要怎么处理啊?非常感谢!
这都好几个月了,整个实验室都不能正常做实验,该怎么毕业啊!
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liuzm021

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fitgene at 2014-11-08 10:03:07
个人觉得你们这个肯定有污染的,如果着急毕业,赶紧先借用关系比较的好的实验室的细胞培养箱,不然你们这个肯定细胞养起来也不能用,还需要观察一段时间的。还有黑色团块是在显微镜还是肉眼下看到的?

谢谢。黑色团块应该是细胞死亡后形成的,但这东西在前几代是没有的。后面可能是实验室其他人的细胞发生后传染到我的瓶子里面(前两天有人的细胞已经出现此现象)。我的操作应该没问题,毕竟有好多年的培养经验了。但是有一个问题是,我们用的都是带滤膜的一次性瓶子,什么样的物质会穿过滤膜呢?
这种物质越多细胞长得越慢。还有一个奇怪的现象是细胞一天不换液的话,细胞就会飘起凋亡,即便是前一天长得很好的细胞也如此。
想问一下,细胞室进水究竟是会导致什么样的污染啊,用过氧乙酸,新洁尔灭都无法消灭。还有什么方法可以用来细胞间消毒?谢谢!

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-11-08 18:28:40
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fitgene

银虫 (著名写手)

辉骏生物


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人觉得你们这个肯定有污染的,如果着急毕业,赶紧先借用关系比较的好的实验室的细胞培养箱,不然你们这个肯定细胞养起来也不能用,还需要观察一段时间的。还有黑色团块是在显微镜还是肉眼下看到的?
2楼2014-11-08 10:03:07
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这名字真难取

新虫 (初入文坛)

楼主,不知道,您最近细胞怎么样了?还是那个样子吗?我可以说我跟你的经历都差不多嘛??
4楼2014-11-26 15:33:36
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