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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » HepG2细胞生长缓慢及复苏后4至5天死亡
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blckly

木虫 (小有名气)

[求助] HepG2细胞生长缓慢及复苏后4至5天死亡

我在养的HepG2细胞，之前生长得很快的，一传六只需要48小时就可以长满到70%以上，但从几个月前开始，生长得特别慢，一传三，一周才能长满70% 左右，而且出现大量小黑点（如图片1），培养基用的是高糖DMEM培养基+10%的新生牛血清，换过批次，没有换厂家，也试过再加1%的非必须氨基酸，但通过加和不加的对照，发现没有区别，生长还是很慢。
请问有什么办法可以让它恢复快速生长？

另外尝试从-80度和液氮罐中取出冻存管复苏，复苏操作都是取出后直接投入37度水浴锅，至完全溶解后吸到离心管加培养基800转离心5分钟，复苏第一天贴壁正常，第二、三天生长是正常的，第三天开始，如果不传代，细胞将出现死亡（如图片2），传代后原代瓶中的细胞暂时不会死亡，但新瓶中的细胞状态很差，并出现大量小黑点，到一周左右，原代及传代瓶中所有细胞基本都死亡。而相同的操作在以前是可以正常复苏生长的。
请问这可能是什么原因引起的？应该怎么避免？这个问题不解决，我连买新的细胞都不敢买了。

谢谢！
HepG2细胞生长缓慢及复苏后4至5天死亡
图片1.JPG


HepG2细胞生长缓慢及复苏后4至5天死亡-1
图片2.JPG
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1楼 2013-11-26 10:50:01
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forensic110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-26 15:29:58
blckly: 金币+5, ★有帮助, 感谢回复，但按此方法，我的问题还是没有解决。 2013-11-28 11:28:24
我养过Hepg2细胞，刚复苏长得比较慢，它是成簇生长的，接种密度多点长得速度还行，大概2-3天长好了。
你的培养基没加双抗？复苏的时候讲究要快，在37度水里多摇两下，差不多化了就离心，时间不宜过长。建议离心后用D-PBS洗一次，离心，再加培养基。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

blckly
2楼2013-11-26 13:16:27
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blckly

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by forensic110 at 2013-11-26 13:16:27
我养过Hepg2细胞，刚复苏长得比较慢，它是成簇生长的，接种密度多点长得速度还行，大概2-3天长好了。
你的培养基没加双抗？复苏的时候讲究要快，在37度水里多摇两下，差不多化了就离心，时间不宜过长。建议离心后用 ...

以前生长速度是挺快的，也是成簇生长，开始现在接种密度一样的情况下，生长速度慢很多。
培养基加双抗和不加双抗都试过，连续一周，观察生长情况和小黑点量没有区别，不过现在还是加双抗的。
我的复苏操作在水浴锅解冻可能接近5分钟，这个时间可能太久了。我再试试操作快一点。
非常感谢！
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3楼2013-11-26 13:34:10
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baiqiao126

铜虫 (初入文坛)
楼主，你的细胞现在好了么？我现在遇到和你一样的问题，连续几次了，复苏后传代一次就死亡。
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4楼2014-06-28 15:38:16
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blckly

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by baiqiao126 at 2014-06-28 15:38:16
楼主，你的细胞现在好了么？我现在遇到和你一样的问题，连续几次了，复苏后传代一次就死亡。

没办法，最后换细胞了……
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5楼2014-06-30 10:59:52
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