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HepG2细胞生长缓慢及复苏后4至5天死亡
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我在养的HepG2细胞，之前生长得很快的，一传六只需要48小时就可以长满到70%以上，但从几个月前开始，生长得特别慢，一传三，一周才能长满70% 左右，而且出现大量小黑点（如图片1），培养基用的是高糖DMEM培养基+10%的新生牛血清，换过批次，没有换厂家，也试过再加1%的非必须氨基酸，但通过加和不加的对照，发现没有区别，生长还是很慢。 请问有什么办法可以让它恢复快速生长？ 另外尝试从-80度和液氮罐中取出冻存管复苏，复苏操作都是取出后直接投入37度水浴锅，至完全溶解后吸到离心管加培养基800转离心5分钟，复苏第一天贴壁正常，第二、三天生长是正常的，第三天开始，如果不传代，细胞将出现死亡（如图片2），传代后原代瓶中的细胞暂时不会死亡，但新瓶中的细胞状态很差，并出现大量小黑点，到一周左右，原代及传代瓶中所有细胞基本都死亡。而相同的操作在以前是可以正常复苏生长的。 请问这可能是什么原因引起的？应该怎么避免？这个问题不解决，我连买新的细胞都不敢买了。 谢谢！  图片1.JPG  图片2.JPG |
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forensic110
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