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[交流]
关于离子交换色谱，提高NaCl 浓度样品保留时间不变，这是为什么呢o>_<o
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最近刚刚接触离子交换色谱，在分离一个蛋白。 我理解的分离原理是，样品在流动相中带上电荷，与柱子中的离子进行交换，从而挂在柱子上，然后用NaCl进行洗脱。越高浓度的NaCl对样品的洗脱能力越强，从而使样品的保留时间变短。 但是最近实验的结果并不是我想象的那样。 实验中，前6分钟走a相平衡柱子（不含NaCl），6-20min进行等度洗脱（分别设置160mM，180mM，200mM，300mM的NaCl浓度），奇怪的是，不论怎么提高盐浓度，第一个峰的出峰时间都在盐溶液洗脱10min左右（盐溶液洗脱4min），区别只是盐浓度提高峰宽变小。 按我的理解，穿透峰出现在2min，那么提高盐浓度应该使保留时间继续减小，使峰出现在盐溶液洗脱2min后，也就是8min。不知道我的理解在哪里出问题了。 附件里面是色谱图。 谢谢大家   160.jpg  180.jpg  200.jpg  300.jpg |
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