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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » HRP标记抗体
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maweisimple

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-11-19 17:43:44
我们用的高碘酸钠法，效价在1:5000到1:10000之间，当然你的抗体得好

嗯嗯，谢谢
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Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
11楼2014-11-20 12:21:00
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可儿不苦

金虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-11-19 17:43:44
我们用的高碘酸钠法，效价在1:5000到1:10000之间，当然你的抗体得好

你的抗体效价是多少呢？我们用的是自己制备的小鼠腹水抗体，效价不高。
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幸福那一个美梦，是二人同行才有。
12楼2014-11-21 10:06:43
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sfeqhl

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 可儿不苦 at 2014-11-21 10:06:43
你的抗体效价是多少呢？我们用的是自己制备的小鼠腹水抗体，效价不高。...

我们抗体效价也挺高的，抗体不好标记效果也不好的。但也遇到过那种本身效价高，但是标记不好的，像这种就是你再重复标记也是标不好的。

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13楼2014-11-21 10:56:07
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maweisimple

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-11-19 17:43:44
我们用的高碘酸钠法，效价在1:5000到1:10000之间，当然你的抗体得好

嗯嗯，怎么判断抗体活性好不好呢
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14楼2014-12-02 15:45:42
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maweisimple

铁虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by ldnh at 2014-11-03 10:50:37
1.HRP分子上缺少能反应的氨基。2.SMCC是一种异型双功能基团，一端和氨基反应，另一端和巯基反应。3.天然IgG上也缺少能反应的自由巯基，要利用DTT或其他一些试剂修饰出能反应的自由巯基。4.一般HRP标记IgG，先用高碘 ...

您好！我用SMCC与IgG的氨基反应，用DTT还原HRP的S-S，仍旧没有反应，这是怎么回事呢？
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15楼2014-12-02 15:48:34
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maweisimple

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 可儿不苦 at 2014-11-21 10:06:43
你的抗体效价是多少呢？我们用的是自己制备的小鼠腹水抗体，效价不高。...

我们也是自己做的腹水纯化的抗体，效价用试纸条测了一下，无法判断精确的效价，只能粗略看一下是否有活性。你们用什么方法？
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16楼2014-12-02 15:51:19
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可儿不苦

金虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by maweisimple at 2014-12-02 15:51:19
我们也是自己做的腹水纯化的抗体，效价用试纸条测了一下，无法判断精确的效价，只能粗略看一下是否有活性。你们用什么方法？...

什么试纸？我们用间接ELISA测效价
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幸福那一个美梦，是二人同行才有。
17楼2014-12-02 15:54:30
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sfeqhl

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
maweisimple: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-12-02 20:28:29
引用回帖:
14楼: Originally posted by maweisimple at 2014-12-02 15:45:42
嗯嗯，怎么判断抗体活性好不好呢...

我们是这样的，用elisa检测，包被抗原，然后用你那个待标记的抗体作为一抗，稀释一定的浓度梯度，然后看你的一抗，如果是鼠源二抗就用羊抗鼠HRP检测。我们一般都是从1ug/ml开始稀释，活性非常好的话到1ng/ml左右OD值可以达到2.0以上

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18楼2014-12-02 16:09:08
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maweisimple

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 可儿不苦 at 2014-12-02 15:54:30
什么试纸？我们用间接ELISA测效价...

胶体金试纸

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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19楼2014-12-02 20:27:26
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maweisimple

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-12-02 16:09:08
我们是这样的，用elisa检测，包被抗原，然后用你那个待标记的抗体作为一抗，稀释一定的浓度梯度，然后看你的一抗，如果是鼠源二抗就用羊抗鼠HRP检测。我们一般都是从1ug/ml开始稀释，活性非常好的话到1ng/ml左右OD ...

嗯嗯，我们标记的是羊抗鼠，包被的是小鼠抗体，可是都是我们自己做的，能同时验证活性吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
20楼2014-12-02 21:05:47
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