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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-11-19 17:43:44
我们用的高碘酸钠法,效价在1:5000到1:10000之间,当然你的抗体得好

嗯嗯,谢谢
Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
11楼2014-11-20 12:21:00
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可儿不苦

金虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-11-19 17:43:44
我们用的高碘酸钠法,效价在1:5000到1:10000之间,当然你的抗体得好

你的抗体效价是多少呢?我们用的是自己制备的小鼠腹水抗体,效价不高。
幸福那一个美梦,是二人同行才有。
12楼2014-11-21 10:06:43
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sfeqhl

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 可儿不苦 at 2014-11-21 10:06:43
你的抗体效价是多少呢?我们用的是自己制备的小鼠腹水抗体,效价不高。...

我们抗体效价也挺高的,抗体不好标记效果也不好的。但也遇到过那种本身效价高,但是标记不好的,像这种就是你再重复标记也是标不好的。

[ 发自小木虫客户端 ]
13楼2014-11-21 10:56:07
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-11-19 17:43:44
我们用的高碘酸钠法,效价在1:5000到1:10000之间,当然你的抗体得好

嗯嗯,怎么判断抗体活性好不好呢
Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
14楼2014-12-02 15:45:42
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ldnh at 2014-11-03 10:50:37
1.HRP分子上缺少能反应的氨基。2.SMCC是一种异型双功能基团,一端和氨基反应,另一端和巯基反应。3.天然IgG上也缺少能反应的自由巯基,要利用DTT或其他一些试剂修饰出能反应的自由巯基。4.一般HRP标记IgG,先用高碘 ...

您好!我用SMCC与IgG的氨基反应,用DTT还原HRP的S-S,仍旧没有反应,这是怎么回事呢?
Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
15楼2014-12-02 15:48:34
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 可儿不苦 at 2014-11-21 10:06:43
你的抗体效价是多少呢?我们用的是自己制备的小鼠腹水抗体,效价不高。...

我们也是自己做的腹水纯化的抗体,效价用试纸条测了一下,无法判断精确的效价,只能粗略看一下是否有活性。你们用什么方法?
Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
16楼2014-12-02 15:51:19
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可儿不苦

金虫 (著名写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by maweisimple at 2014-12-02 15:51:19
我们也是自己做的腹水纯化的抗体,效价用试纸条测了一下,无法判断精确的效价,只能粗略看一下是否有活性。你们用什么方法?...

什么试纸?我们用间接ELISA测效价
幸福那一个美梦,是二人同行才有。
17楼2014-12-02 15:54:30
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sfeqhl

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


maweisimple: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-12-02 20:28:29
引用回帖:
14楼: Originally posted by maweisimple at 2014-12-02 15:45:42
嗯嗯,怎么判断抗体活性好不好呢...

我们是这样的,用elisa检测,包被抗原,然后用你那个待标记的抗体作为一抗,稀释一定的浓度梯度,然后看你的一抗,如果是鼠源二抗就用羊抗鼠HRP检测。我们一般都是从1ug/ml开始稀释,活性非常好的话到1ng/ml左右OD值可以达到2.0以上

[ 发自小木虫客户端 ]
18楼2014-12-02 16:09:08
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 可儿不苦 at 2014-12-02 15:54:30
什么试纸?我们用间接ELISA测效价...

胶体金试纸

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
19楼2014-12-02 20:27:26
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-12-02 16:09:08
我们是这样的,用elisa检测,包被抗原,然后用你那个待标记的抗体作为一抗,稀释一定的浓度梯度,然后看你的一抗,如果是鼠源二抗就用羊抗鼠HRP检测。我们一般都是从1ug/ml开始稀释,活性非常好的话到1ng/ml左右OD ...

嗯嗯,我们标记的是羊抗鼠,包被的是小鼠抗体,可是都是我们自己做的,能同时验证活性吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
20楼2014-12-02 21:05:47
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