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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

[求助] HRP标记抗体 已有4人参与

大家好,最近做HRP标记抗体,参照的是Bioconjugate Techniques,3rd Edition和Thermo的sulfo-SMCC的说明书,可是经过ELISA检测,完全没标上。请问大家有做过这个标记的吗?是什么样的流程呢?哪个步骤是最关键的环节?
拜托拜托~
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Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
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可儿不苦

金虫 (著名写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by maweisimple at 2014-12-02 15:51:19
我们也是自己做的腹水纯化的抗体,效价用试纸条测了一下,无法判断精确的效价,只能粗略看一下是否有活性。你们用什么方法?...

什么试纸?我们用间接ELISA测效价
幸福那一个美梦,是二人同行才有。
17楼2014-12-02 15:54:30
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ldnh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
maweisimple: 金币+4, ★★★很有帮助, 简洁明了,谢谢! 2014-11-03 13:38:36
1.HRP分子上缺少能反应的氨基。2.SMCC是一种异型双功能基团,一端和氨基反应,另一端和巯基反应。3.天然IgG上也缺少能反应的自由巯基,要利用DTT或其他一些试剂修饰出能反应的自由巯基。4.一般HRP标记IgG,先用高碘酸钠氧化HRP,产生醛基,醛基能和IgG上富含的氨基生成席弗碱反应,从而达到耦联目的。
厚德载物,勤劳致富
2楼2014-11-03 10:50:37
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ldnh at 2014-11-03 10:50:37
1.HRP分子上缺少能反应的氨基。2.SMCC是一种异型双功能基团,一端和氨基反应,另一端和巯基反应。3.天然IgG上也缺少能反应的自由巯基,要利用DTT或其他一些试剂修饰出能反应的自由巯基。4.一般HRP标记IgG,先用高碘 ...

太悲催了,SMCC已经买完了,请问还有挽救的余地吗?
Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
3楼2014-11-03 13:39:06
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ldnh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by maweisimple at 2014-11-03 13:39:06
太悲催了,SMCC已经买完了,请问还有挽救的余地吗?...

SMCC一般不用于抗体耦联HRP,其他酶类可以用这种方法。商品化的HRP标记二抗一般都用高碘酸钠氧化HRP,再耦联IgG.你可以试试这个方法。你是用来标记一抗吗?
厚德载物,勤劳致富
4楼2014-11-03 14:22:17
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