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limichuan

金虫 (正式写手)

免疫学实验超人qq:858200882

【答案】应助回帖

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maweisimple: 金币+1, 有帮助 2014-12-03 08:17:20
引用回帖:
20楼: Originally posted by maweisimple at 2014-12-02 21:05:47
嗯嗯,我们标记的是羊抗鼠,包被的是小鼠抗体,可是都是我们自己做的,能同时验证活性吗
...

怎么感觉大家都没怎么做过这方面实验似的的呢。抗体制备一般都会测定效价,商业化的鼠单抗一般不会小于十万。标记后的活性是另一回事了,一般在几千到几万不等。现在通用的方法是高碘酸钠法,简单易行,成本低。
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21楼2014-12-02 22:18:26
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
21楼: Originally posted by limichuan at 2014-12-02 22:18:26
怎么感觉大家都没怎么做过这方面实验似的的呢。抗体制备一般都会测定效价,商业化的鼠单抗一般不会小于十万。标记后的活性是另一回事了,一般在几千到几万不等。现在通用的方法是高碘酸钠法,简单易行,成本低。...

谢谢

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Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
22楼2014-12-03 08:17:07
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sfeqhl

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
20楼: Originally posted by maweisimple at 2014-12-02 21:05:47
嗯嗯,我们标记的是羊抗鼠,包被的是小鼠抗体,可是都是我们自己做的,能同时验证活性吗
...

可以啊,我们一般都是在标记前留点样,标记完后一起检测

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23楼2014-12-03 08:20:53
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sfeqhl

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
20楼: Originally posted by maweisimple at 2014-12-02 21:05:47
嗯嗯,我们标记的是羊抗鼠,包被的是小鼠抗体,可是都是我们自己做的,能同时验证活性吗
...

另外补充下,你如果待标记抗体是羊抗鼠的话,检测抗体本身效价时二抗可以用驴抗羊-HRP

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24楼2014-12-03 08:26:21
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ldnh

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by maweisimple at 2014-12-02 15:48:34
您好!我用SMCC与IgG的氨基反应,用DTT还原HRP的S-S,仍旧没有反应,这是怎么回事呢?...

DTT修饰HRP应该是无效的,无法得到自由巯基。没必要加一个SMCC在中间,可以氧化HRP分子上的糖环,得到醛基,再与IgG分子上的NH2反应,生成席弗碱,最后NaBH4还原,得到稳定的偶联产物。
厚德载物,勤劳致富
25楼2014-12-03 13:34:52
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
25楼: Originally posted by ldnh at 2014-12-03 13:34:52
DTT修饰HRP应该是无效的,无法得到自由巯基。没必要加一个SMCC在中间,可以氧化HRP分子上的糖环,得到醛基,再与IgG分子上的NH2反应,生成席弗碱,最后NaBH4还原,得到稳定的偶联产物。...

主要是smcc买完了,想要用上

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26楼2014-12-03 18:58:37
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huajiahu

金虫 (小有名气)

楼主用的是国外的HRP标记试剂盒吗?
27楼2015-11-06 17:17:11
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
27楼: Originally posted by huajiahu at 2015-11-06 17:17:11
楼主用的是国外的HRP标记试剂盒吗?

是的。

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28楼2015-11-07 07:27:17
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huajiahu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
28楼: Originally posted by maweisimple at 2015-11-07 07:27:17
是的。
...

我在用国内标记试剂盒还可以用,不知道适不适合你,可以标记微量抗体。

发自小木虫IOS客户端
29楼2015-11-07 22:47:55
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
29楼: Originally posted by huajiahu at 2015-11-07 22:47:55
我在用国内标记试剂盒还可以用,不知道适不适合你,可以标记微量抗体。
...

谢谢!

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30楼2015-11-08 08:20:45
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