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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » HRP标记抗体
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

[求助] HRP标记抗体 已有4人参与

大家好，最近做HRP标记抗体，参照的是Bioconjugate Techniques,3rd Edition和Thermo的sulfo-SMCC的说明书，可是经过ELISA检测，完全没标上。请问大家有做过这个标记的吗？是什么样的流程呢？哪个步骤是最关键的环节？
拜托拜托~
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Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
1楼 2014-11-02 21:57:41
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maweisimple

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
25楼: Originally posted by ldnh at 2014-12-03 13:34:52
DTT修饰ＨＲＰ应该是无效的，无法得到自由巯基。没必要加一个SMCC在中间，可以氧化HRP分子上的糖环，得到醛基，再与IgG分子上的NH2反应，生成席弗碱，最后NaBH4还原，得到稳定的偶联产物。...

主要是smcc买完了，想要用上

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
26楼2014-12-03 18:58:37
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ldnh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
maweisimple: 金币+4, ★★★很有帮助, 简洁明了，谢谢！ 2014-11-03 13:38:36
1.HRP分子上缺少能反应的氨基。2.SMCC是一种异型双功能基团，一端和氨基反应，另一端和巯基反应。3.天然IgG上也缺少能反应的自由巯基，要利用DTT或其他一些试剂修饰出能反应的自由巯基。4.一般HRP标记IgG，先用高碘酸钠氧化HRP，产生醛基，醛基能和IgG上富含的氨基生成席弗碱反应，从而达到耦联目的。
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厚德载物，勤劳致富
2楼2014-11-03 10:50:37
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maweisimple

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ldnh at 2014-11-03 10:50:37
1.HRP分子上缺少能反应的氨基。2.SMCC是一种异型双功能基团，一端和氨基反应，另一端和巯基反应。3.天然IgG上也缺少能反应的自由巯基，要利用DTT或其他一些试剂修饰出能反应的自由巯基。4.一般HRP标记IgG，先用高碘 ...

太悲催了，SMCC已经买完了，请问还有挽救的余地吗？
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Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
3楼2014-11-03 13:39:06
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ldnh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by maweisimple at 2014-11-03 13:39:06
太悲催了，SMCC已经买完了，请问还有挽救的余地吗？...

SMCC一般不用于抗体耦联HRP，其他酶类可以用这种方法。商品化的HRP标记二抗一般都用高碘酸钠氧化HRP，再耦联IgG.你可以试试这个方法。你是用来标记一抗吗？
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厚德载物，勤劳致富
4楼2014-11-03 14:22:17
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