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alexnoname

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助 毛状根一直诱导不出 求大神指导 已有6人参与

如题 毛状根诱导已经做了差不多两个月了,还是没什么结果,想请教一下有做过毛状根诱导的大神。我们的步骤是这样的,外植体是冬凌草,是香茶菜科的植物,菌种是在华南菌种保藏中心买的atcc11325,用ynb培养基培养出来的,诱导方法是先把叶片从外植体切下,接到培养基上黑暗预培养2d以上(培养基有用ms还有诱导愈伤组织的培养基),菌种买来后经过三次继代活化后划平板挑单菌落,摇出来后甘油保种,要侵染之前2d先活化一次,再用锥形瓶摇,接种量为百分之1,侵染时用ms培养液把其稀释到od600=0.4 加入AS母液使其终浓度为100umol/L ,侵染30min,侵染后放回原培养基共培养1d,之后就用400cef的除菌培养基除菌,但是等了两个星期以上都没有出现毛状根,不过边缘有愈伤组织生长。请问我们的实验步骤有没有问题?我们初步分析有可能是菌种问题,请问该菌株的侵染是否有种属的选择性?虚心请教,先谢谢各位了
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chengqw

新虫 (小有名气)


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这个菌种不常用吧?!广东菌种保藏中心也没给出它的功能。不知道lz看没看过《药用植物毛状根的诱导及应用》(张萌等2014年,中国中药杂志)这篇论文,我之前看过一些毛状根的论文,但没做过。上边有介绍到试验中常用到的菌种,你可以参考一下。
5楼2014-11-09 00:11:56
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alexnoname

新虫 (初入文坛)

自顶下,希望让更多人看到
2楼2014-10-30 21:11:31
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honghu185

木虫 (小有名气)


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菌种我没有用过,诱导毛状根我们一般加0.2mg/L的生长素。
3楼2014-11-02 10:56:16
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chongzhongzi

铁虫 (小有名气)


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我以前做过组培,但菌种的没做过。。。。我想说的是,生根不是的有相应的生根培养基吗,你用愈伤培养基,怎么让生根啊!!!这有可能是培养基问题,或者是培养条件(如这种植物的生活习性等),再或者与菌体有关,综合考虑,做预实验、、、、
4楼2014-11-03 22:39:10
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chengqw

新虫 (小有名气)


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还有文章《金铁锁毛状根诱导的初步研究》(赵爽等2012)还提到乙酰丁香酮(AS)对毛状根诱导有影响,楼主可以参考。
6楼2014-11-09 00:17:43
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alexnoname

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by chengqw at 2014-11-09 00:11:56
这个菌种不常用吧?!广东菌种保藏中心也没给出它的功能。不知道lz看没看过《药用植物毛状根的诱导及应用》(张萌等2014年,中国中药杂志)这篇论文,我之前看过一些毛状根的论文,但没做过。上边有介绍到试验中常用 ...

恩恩,谢谢啦,其实我也一直很怀疑是不是菌种的问题。。但是我也有找到一篇文献是关于用这个菌种诱导花生的毛状根的,只是诱导率较低而已。。还是看能不能换个菌种来试试吧。
7楼2014-11-12 01:06:12
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guxinhan123

银虫 (正式写手)


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楼主在哪里啊?可以多试验几个菌种试试
8楼2014-11-12 12:49:16
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chengqw

新虫 (小有名气)


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引用回帖:
7楼: Originally posted by alexnoname at 2014-11-12 01:06:12
恩恩,谢谢啦,其实我也一直很怀疑是不是菌种的问题。。但是我也有找到一篇文献是关于用这个菌种诱导花生的毛状根的,只是诱导率较低而已。。还是看能不能换个菌种来试试吧。...

楼主目前做的怎么样了?你QQ是多少?我以后如果做到毛状根的时候也可以向你请教。
9楼2014-11-12 17:23:06
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zhenguiju

金虫 (小有名气)


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我正在做另一种植物  诱导出来了 但是除菌后就不怎么长了
10楼2014-12-15 13:57:37
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