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高压均质以及透析时间对蛋白质结构的影响
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本人刚进行蛋白质表达与提纯的实验，是重复老板的实验。目的蛋白的功能要求有折叠。 由于目的蛋白具有很多ELP的重复序列，加上目的质粒是pQE系列的，所以蛋白表达时间过长会出现降解情况。 均质是在1000bar-1500bar，2次。均质后性状为含有悬浮颗粒的浊液，40000g，20min得到清液，过柱提纯。 SDS-PAGE结果证明了是目的蛋白，纯度不低。之后4度搅拌下进行透析。 有以下几种现象： 1.透析时间超过48小时后（换了约6次水，白天是6-8小时一换，晚上过夜）出现浑浊现象。40000g离心可得清液。 2.清液冻干时发现蛋白质呈现长条蘑菇状，而非一些蓬松棉花状。 3.结果发现蛋白质水溶性极差（目标蛋白应该有极好的水溶性） 老板非说是均质压力过高，而且没加溶菌酶（均质前只加了PMSF/Mg离子/DNase）导致的蛋白质可能结构有问题，而且不是透析时间过长导致的。 请问有没有富有经验的人能够分享一下经验，或者指出一些可能的操作问题？多谢！ |
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