| 查看: 828 | 回复: 0 | |||
[交流]
高压均质以及透析时间对蛋白质结构的影响
|
|
本人刚进行蛋白质表达与提纯的实验，是重复老板的实验。目的蛋白的功能要求有折叠。 由于目的蛋白具有很多ELP的重复序列，加上目的质粒是pQE系列的，所以蛋白表达时间过长会出现降解情况。 均质是在1000bar-1500bar，2次。均质后性状为含有悬浮颗粒的浊液，40000g，20min得到清液，过柱提纯。 SDS-PAGE结果证明了是目的蛋白，纯度不低。之后4度搅拌下进行透析。 有以下几种现象： 1.透析时间超过48小时后（换了约6次水，白天是6-8小时一换，晚上过夜）出现浑浊现象。40000g离心可得清液。 2.清液冻干时发现蛋白质呈现长条蘑菇状，而非一些蓬松棉花状。 3.结果发现蛋白质水溶性极差（目标蛋白应该有极好的水溶性） 老板非说是均质压力过高，而且没加溶菌酶（均质前只加了PMSF/Mg离子/DNase）导致的蛋白质可能结构有问题，而且不是透析时间过长导致的。 请问有没有富有经验的人能够分享一下经验，或者指出一些可能的操作问题？多谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
283求调剂（080500）
已经有3人回复
-
286求调剂
已经有7人回复
-
一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分
已经有4人回复
-
308求调剂
已经有6人回复
-
275求调剂
已经有6人回复
-
求调剂
已经有5人回复
-
287求调剂
已经有9人回复
-
274求调剂
已经有23人回复
-
085602 化工专硕 338分 求调剂
已经有6人回复
-
085600材料与化工调剂
已经有16人回复
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
透析属于蛋白质的浓缩方法吗？
已经有6人回复
- 酸奶发酵前添加了少量蛋白粉，发酵完成后蛋白粉出现沉淀
已经有7人回复
- 透析浓缩前后蛋白质量的变化
已经有3人回复
- 求使用超滤膜或者透析袋浓缩蛋白质的具体标准方法
已经有9人回复
- 关于蛋白质透析所遇到的问题
已经有12人回复
- 关于细胞实验是否必须要除盐和蛋白质透析的问题
已经有11人回复
- 蛋白质透析除盐中的问题
已经有4人回复
- 均质或超声处理蛋白质药物，对其会有什么影响吗？
已经有4人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
