3楼: Originally posted by cuihao102 at 2014-10-28 21:12:36
如果你这个菌以前没有做过接合转移，也就是说没有成熟的接合转移系统，就应该先摸索条件，包括热激活温度，预萌发时间，孢子浓度，大肠杆菌浓度，盖药时间，盖药终浓度等等。

2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-10-28 18:28:09
做过结合但不是双歧杆菌，你怎么做的不成功？如果可以通过结合应该很容易。

6楼: Originally posted by bainaling at 2014-10-29 11:18:54
是两亲接合吗？我觉得最好也是先看文献中是否有关于双歧的突变库的构建，用的是什么质粒，然后根据文献中的操作再摸索条件

5楼: Originally posted by 原始深林 at 2014-10-29 09:53:06
根据文献是大肠和双歧接触会将质粒导入到双歧中，大肠是构建的工程菌呀，不知道怎么一直不成功，请问楼主是怎么做的结合呀，结合需要注意什么...

8楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-10-29 17:30:02
是按照成熟的体系进行的，应该很容易的。1、你用的是自杀质粒和可自主复制到质粒？如果是自主复制型的，是否在你做的菌中可用呢？2、另外就是抗性筛选是否合适？有没有可能是抗性基因没表达或活性较低。3、其他就是 ...

9楼: Originally posted by 原始深林 at 2014-10-30 08:33:05
我用的是自主复制型质粒，在大肠里能用，双歧的话没有听说不能用的，抗性筛选是没问题的，我做的是双歧，革兰氏阳性菌，细胞壁厚。非常感谢大神的指点，这些问题我都没想到过。...