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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 结合转移
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原始深林

银虫 (初入文坛)

[求助] 结合转移 已有2人参与

有没有哪位大神做结合转移的呀，我做大肠杆菌和双歧杆菌的结合转移已经两个月了，一直无法成功呀，求大神指点呀，不胜感激!
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实验狗伤不起，改行好不好
1楼 2014-10-28 15:30:02
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cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你这个菌以前没有做过接合转移，也就是说没有成熟的接合转移系统，就应该先摸索条件，包括热激活温度，预萌发时间，孢子浓度，大肠杆菌浓度，盖药时间，盖药终浓度等等。
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3楼2014-10-28 21:12:36
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做过结合但不是双歧杆菌，你怎么做的不成功？如果可以通过结合应该很容易。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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原始深林
2楼2014-10-28 18:28:09
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原始深林

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cuihao102 at 2014-10-28 21:12:36
如果你这个菌以前没有做过接合转移，也就是说没有成熟的接合转移系统，就应该先摸索条件，包括热激活温度，预萌发时间，孢子浓度，大肠杆菌浓度，盖药时间，盖药终浓度等等。

我是根据一篇外文文献做的，直接将大肠和双歧在平板上培养厌氧12h，大肠和双歧接触的话，质粒就可以转移到双歧当中了，大肠是构建好的工程菌，但是一直都没成功
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实验狗伤不起，改行好不好
4楼2014-10-29 09:48:41
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原始深林

银虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-10-28 18:28:09
做过结合但不是双歧杆菌，你怎么做的不成功？如果可以通过结合应该很容易。

根据文献是大肠和双歧接触会将质粒导入到双歧中，大肠是构建的工程菌呀，不知道怎么一直不成功，请问楼主是怎么做的结合呀，结合需要注意什么
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实验狗伤不起，改行好不好
5楼2014-10-29 09:53:06
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bainaling

铁杆木虫 (正式写手)
是两亲接合吗？我觉得最好也是先看文献中是否有关于双歧的突变库的构建，用的是什么质粒，然后根据文献中的操作再摸索条件
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原始深林
6楼2014-10-29 11:18:54
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原始深林

银虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by bainaling at 2014-10-29 11:18:54
是两亲接合吗？我觉得最好也是先看文献中是否有关于双歧的突变库的构建，用的是什么质粒，然后根据文献中的操作再摸索条件

是两亲结合，用的是pUZ8002/pHL931的质粒，我是直接根据文献条件做的
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实验狗伤不起，改行好不好
7楼2014-10-29 15:34:21
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
原始深林: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-10-30 08:27:12
引用回帖:
5楼: Originally posted by 原始深林 at 2014-10-29 09:53:06
根据文献是大肠和双歧接触会将质粒导入到双歧中，大肠是构建的工程菌呀，不知道怎么一直不成功，请问楼主是怎么做的结合呀，结合需要注意什么...

是按照成熟的体系进行的，应该很容易的。1、你用的是自杀质粒和可自主复制到质粒？如果是自主复制型的，是否在你做的菌中可用呢？2、另外就是抗性筛选是否合适？有没有可能是抗性基因没表达或活性较低。3、其他就是你做的菌的特性，比如细胞壁和细胞膜的结构，限制修饰系统等。
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原始深林
8楼2014-10-29 17:30:02
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原始深林

银虫 (初入文坛)
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引用回帖:
8楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-10-29 17:30:02
是按照成熟的体系进行的，应该很容易的。1、你用的是自杀质粒和可自主复制到质粒？如果是自主复制型的，是否在你做的菌中可用呢？2、另外就是抗性筛选是否合适？有没有可能是抗性基因没表达或活性较低。3、其他就是 ...

我用的是自主复制型质粒，在大肠里能用，双歧的话没有听说不能用的，抗性筛选是没问题的，我做的是双歧，革兰氏阳性菌，细胞壁厚。非常感谢大神的指点，这些问题我都没想到过。
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实验狗伤不起，改行好不好
9楼2014-10-30 08:33:05
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 原始深林 at 2014-10-30 08:33:05
我用的是自主复制型质粒，在大肠里能用，双歧的话没有听说不能用的，抗性筛选是没问题的，我做的是双歧，革兰氏阳性菌，细胞壁厚。非常感谢大神的指点，这些问题我都没想到过。...

祝你实验顺利！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2014-10-30 08:51:57
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