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原始深林

银虫 (初入文坛)

[求助] 结合转移 已有2人参与

有没有哪位大神做结合转移的呀,我做大肠杆菌和双歧杆菌的结合转移已经两个月了,一直无法成功呀,求大神指点呀,不胜感激!
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实验狗伤不起,改行好不好
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原始深林

银虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-10-29 17:30:02
是按照成熟的体系进行的,应该很容易的。1、你用的是自杀质粒和可自主复制到质粒?如果是自主复制型的,是否在你做的菌中可用呢?2、另外就是抗性筛选是否合适?有没有可能是抗性基因没表达或活性较低。3、其他就是 ...

我用的是自主复制型质粒,在大肠里能用,双歧的话没有听说不能用的,抗性筛选是没问题的,我做的是双歧,革兰氏阳性菌,细胞壁厚。非常感谢大神的指点,这些问题我都没想到过。
实验狗伤不起,改行好不好
9楼2014-10-30 08:33:05
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做过结合但不是双歧杆菌,你怎么做的不成功?如果可以通过结合应该很容易。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-10-28 18:28:09
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cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果你这个菌以前没有做过接合转移,也就是说没有成熟的接合转移系统,就应该先摸索条件,包括热激活温度,预萌发时间,孢子浓度,大肠杆菌浓度,盖药时间,盖药终浓度等等。
3楼2014-10-28 21:12:36
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原始深林

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cuihao102 at 2014-10-28 21:12:36
如果你这个菌以前没有做过接合转移,也就是说没有成熟的接合转移系统,就应该先摸索条件,包括热激活温度,预萌发时间,孢子浓度,大肠杆菌浓度,盖药时间,盖药终浓度等等。

我是根据一篇外文文献做的,直接将大肠和双歧在平板上培养厌氧12h,大肠和双歧接触的话,质粒就可以转移到双歧当中了,大肠是构建好的工程菌,但是一直都没成功
实验狗伤不起,改行好不好
4楼2014-10-29 09:48:41
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