应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 结合转移
121/2返回列表12下一页
查看: 1121  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

原始深林

银虫 (初入文坛)

[求助] 结合转移 已有2人参与

有没有哪位大神做结合转移的呀，我做大肠杆菌和双歧杆菌的结合转移已经两个月了，一直无法成功呀，求大神指点呀，不胜感激!
回复此楼

» 猜你喜欢
实验狗伤不起，改行好不好
1楼 2014-10-28 15:30:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你这个菌以前没有做过接合转移，也就是说没有成熟的接合转移系统，就应该先摸索条件，包括热激活温度，预萌发时间，孢子浓度，大肠杆菌浓度，盖药时间，盖药终浓度等等。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-10-28 21:12:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做过结合但不是双歧杆菌，你怎么做的不成功？如果可以通过结合应该很容易。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

原始深林
2楼2014-10-28 18:28:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原始深林

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cuihao102 at 2014-10-28 21:12:36
如果你这个菌以前没有做过接合转移，也就是说没有成熟的接合转移系统，就应该先摸索条件，包括热激活温度，预萌发时间，孢子浓度，大肠杆菌浓度，盖药时间，盖药终浓度等等。

我是根据一篇外文文献做的，直接将大肠和双歧在平板上培养厌氧12h，大肠和双歧接触的话，质粒就可以转移到双歧当中了，大肠是构建好的工程菌，但是一直都没成功
赞一下 回复此楼
实验狗伤不起，改行好不好
4楼2014-10-29 09:48:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原始深林

银虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-10-28 18:28:09
做过结合但不是双歧杆菌，你怎么做的不成功？如果可以通过结合应该很容易。

根据文献是大肠和双歧接触会将质粒导入到双歧中，大肠是构建的工程菌呀，不知道怎么一直不成功，请问楼主是怎么做的结合呀，结合需要注意什么
赞一下 回复此楼
实验狗伤不起，改行好不好
5楼2014-10-29 09:53:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bainaling

铁杆木虫 (正式写手)
是两亲接合吗？我觉得最好也是先看文献中是否有关于双歧的突变库的构建，用的是什么质粒，然后根据文献中的操作再摸索条件
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

原始深林
6楼2014-10-29 11:18:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原始深林

银虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by bainaling at 2014-10-29 11:18:54
是两亲接合吗？我觉得最好也是先看文献中是否有关于双歧的突变库的构建，用的是什么质粒，然后根据文献中的操作再摸索条件

是两亲结合，用的是pUZ8002/pHL931的质粒，我是直接根据文献条件做的
赞一下 回复此楼
实验狗伤不起，改行好不好
7楼2014-10-29 15:34:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
原始深林: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-10-30 08:27:12
引用回帖:
5楼: Originally posted by 原始深林 at 2014-10-29 09:53:06
根据文献是大肠和双歧接触会将质粒导入到双歧中，大肠是构建的工程菌呀，不知道怎么一直不成功，请问楼主是怎么做的结合呀，结合需要注意什么...

是按照成熟的体系进行的，应该很容易的。1、你用的是自杀质粒和可自主复制到质粒？如果是自主复制型的，是否在你做的菌中可用呢？2、另外就是抗性筛选是否合适？有没有可能是抗性基因没表达或活性较低。3、其他就是你做的菌的特性，比如细胞壁和细胞膜的结构，限制修饰系统等。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

原始深林
8楼2014-10-29 17:30:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原始深林

银虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-10-29 17:30:02
是按照成熟的体系进行的，应该很容易的。1、你用的是自杀质粒和可自主复制到质粒？如果是自主复制型的，是否在你做的菌中可用呢？2、另外就是抗性筛选是否合适？有没有可能是抗性基因没表达或活性较低。3、其他就是 ...

我用的是自主复制型质粒，在大肠里能用，双歧的话没有听说不能用的，抗性筛选是没问题的，我做的是双歧，革兰氏阳性菌，细胞壁厚。非常感谢大神的指点，这些问题我都没想到过。
赞一下 回复此楼
实验狗伤不起，改行好不好
9楼2014-10-30 08:33:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 原始深林 at 2014-10-30 08:33:05
我用的是自主复制型质粒，在大肠里能用，双歧的话没有听说不能用的，抗性筛选是没问题的，我做的是双歧，革兰氏阳性菌，细胞壁厚。非常感谢大神的指点，这些问题我都没想到过。...

祝你实验顺利！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
10楼2014-10-30 08:51:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 原始深林 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 086003食品工程求调剂 +3 淼淼111 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:47 by 云游重阳
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 招08考数学 +6 laoshidan 2026-03-20 14/700 2026-03-23 14:37 by 15614359529
[考研] 306求调剂 +9 chuanzhu川烛 2026-03-18 9/450 2026-03-23 13:17 by luoyongfeng
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 生物学071000 329分求调剂 +5 我爱生物生物爱� 2026-03-17 5/250 2026-03-22 16:42 by tcx007
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭