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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞免疫荧光求助
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情系石河子

金虫 (小有名气)

[求助] 细胞免疫荧光求助

细胞免疫荧光实验步骤：
1. 生长在盖玻片上的细胞小心用PBS清洗2次；
2. 4%多聚甲醛室温下固定（15-30min）;
3. PBS清洗3次，每次5min;
4.0.1%Tritonx-100 通透30min，PBS洗三遍。
5. 封闭液封闭 (3%的BSA-牛血清白蛋白)的PBS 37度30min-1h，
6.弃去封闭液不需要清洗，加一抗，4度湿盒过夜或者37度1-2h；
7. PBS洗3次，每次5-10min；
8. 加荧光标记的二抗，37度避光孵育1h或者室温2小时;
9. PBS洗3次，每次5min，注意避光操作。
10. 最后封片，激光共聚焦观察拍照。
注：如果需要染核在第8和9步骤之间加一步DAPI染色，DAPI室温5min效果很好。

DAPI染细胞核的时候，老是出现一些乱七八糟的现象，求高手帮忙解疑！

细胞免疫荧光求助
141017-0006.jpg
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吃地苦中苦，方为人上人
1楼 2014-10-24 10:45:31
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cuihao102

木虫 (小有名气)
专业只是我不懂，一看石河子，校友
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2楼2014-10-24 11:04:30
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刘芳$

铁虫 (初入文坛)
是不是你的细胞里有其他细胞呢，因为DAPI是与DNA作用的，如果有其他细胞的话，其他细胞也会被染色，干扰观察
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3楼2014-11-12 09:57:17
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whl0818

银虫 (小有名气)
会不会是因为有支原体污染啊？
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4楼2014-12-01 19:02:10
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