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[求助]
细胞免疫荧光求助
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细胞免疫荧光实验步骤： 1. 生长在盖玻片上的细胞小心用PBS清洗2次； 2. 4%多聚甲醛室温下固定（15-30min）; 3. PBS清洗3次，每次5min; 4.0.1%Tritonx-100 通透30min，PBS洗三遍。 5. 封闭液封闭 (3%的BSA-牛血清白蛋白)的PBS 37度30min-1h， 6.弃去封闭液不需要清洗，加一抗，4度湿盒过夜或者37度1-2h； 7. PBS洗3次，每次5-10min； 8. 加荧光标记的二抗，37度避光孵育1h或者室温2小时; 9. PBS洗3次，每次5min，注意避光操作。 10. 最后封片，激光共聚焦观察拍照。 注：如果需要染核在第8和9步骤之间加一步DAPI染色，DAPI室温5min效果很好。 DAPI染细胞核的时候，老是出现一些乱七八糟的现象，求高手帮忙解疑！  141017-0006.jpg |
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