应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 有关PCR退火温度设计的问题
61/1返回列表
查看: 781  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

mahanxiaoa

新虫 (初入文坛)

[交流] 有关PCR退火温度设计的问题

请教大家一个问题我设计的一对引物如下：F-Primer        CGCTACAGCGCCGTCGCCA        R-Primer        GATCTCGACGCCGATGGCCTT  
                                                                                                                   Percent GC:        73        Percent GC:        61
                                                                                                                             Tm:        67        Tm:        64
如果严格按照引物设计原则这对引物是不符合要求的，但由于序列的原因，只能这样设计了。麻烦大家能不能推荐几个网上自动设计引物的网址？如果Tm如上面所示，那我进行PCR时退火温度应该设为多少？另外我要验证目的基因与载体连接成功与否除了菌落PCR和双酶切验证外还有没有别的方法？请各位指点迷津，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-10-17 20:45:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

怪叔叔推倒你

木虫 (正式写手)
http://primerdepot.nci.nih.gov/ ，我们用这个设计的引物序列；
一般选择退火温度 TM-5℃，Primer premier 5.0可以软件计算。
赞一下(1人) 回复此楼
勤奋勇敢，善良坚韧。
2楼2014-10-24 16:51:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahanxiaoa

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 怪叔叔推倒你 at 2014-10-24 17:51:58
http://primerdepot.nci.nih.gov/ ，我们用这个设计的引物序列；
一般选择退火温度 TM-5℃，Primer premier 5.0可以软件计算。

谢谢！
回复此楼
3楼2014-10-28 16:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaokexue

新虫 (小有名气)
验证转录成功与否最好的方法就是测序，PCR其实没有想象的那么难，不必拘谨与理论，以后你会发现，即使实验条件与理论不符也能做出来。还有，如果PCR不出目的产物，试试梯度PCR，一般都能做出来

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-11-24 14:22:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahanxiaoa

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaokexue at 2014-11-24 15:22:38
验证转录成功与否最好的方法就是测序，PCR其实没有想象的那么难，不必拘谨与理论，以后你会发现，即使实验条件与理论不符也能做出来。还有，如果PCR不出目的产物，试试梯度PCR，一般都能做出来
...

谢谢你！
回复此楼
5楼2015-01-16 12:59:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahanxiaoa

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 怪叔叔推倒你 at 2014-10-24 17:51:58
http://primerdepot.nci.nih.gov/ ，我们用这个设计的引物序列；
一般选择退火温度 TM-5℃，Primer premier 5.0可以软件计算。

谢谢！
回复此楼
6楼2015-01-16 12:59:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mahanxiaoa 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 求调剂材料学硕080500，总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 070300化学求调剂 +5 苑豆豆 2026-03-20 5/250 2026-03-23 09:39 by guoliang1816
[考研] 085600材料与化工 +10 安全上岸！ 2026-03-16 10/500 2026-03-23 09:31 by Jy?
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 352求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123！
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭