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有关PCR退火温度设计的问题
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请教大家一个问题我设计的一对引物如下：F-Primer CGCTACAGCGCCGTCGCCA R-Primer GATCTCGACGCCGATGGCCTT Percent GC: 73 Percent GC: 61 Tm: 67 Tm: 64 如果严格按照引物设计原则这对引物是不符合要求的，但由于序列的原因，只能这样设计了。麻烦大家能不能推荐几个网上自动设计引物的网址？如果Tm如上面所示，那我进行PCR时退火温度应该设为多少？另外我要验证目的基因与载体连接成功与否除了菌落PCR和双酶切验证外还有没有别的方法？请各位指点迷津，谢谢！ |
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6楼2015-01-16 12:59:39
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- 性别: GG
- 专业: 理论和计算化学
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http://primerdepot.nci.nih.gov/ ，我们用这个设计的引物序列； 一般选择退火温度 TM-5℃，Primer premier 5.0可以软件计算。 |
2楼2014-10-24 16:51:58
3楼2014-10-28 16:31:37
4楼2014-11-24 14:22:38