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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 三亲结合问题
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180803014

新虫 (小有名气)

[求助] 三亲结合问题 已有1人参与

本人现在在做随机插入，用的是psc123这个质粒，受体菌（链霉素50ppm）：供体菌(卡那霉素50ppm)：协助菌（氯霉素35ppm）=10:1:1，第一次的时候结合的效率挺好的，从第二次开始，结合效率就很低，结合的菌长得很少，psc123在双抗平板上涂布上总长白色的小杂菌，但结合的上面没长（结合的菌与杂菌能明显分辨出来），后来换成了受体菌：供体菌：协助菌=2:1:1，结合的就直接不长了，平板上（双抗）长的都是小的杂菌，psc123的板子上也是，后来又换成了10:1:1，但是结合的还是不长，还是长满杂菌。以为是psc123不纯，可是已经纯化好多代了，就算有杂菌，难道就不结合了吗，直接把psc123在含链霉素的lb平板上划线，什么都没长，接到含链霉素的lb液体里也没长。现在准备吧链霉素的浓度提高，但不知道会不会对结合产生影响，现在好苦恼，不知道什么原因，忘大神指点一二！
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加油
1楼 2014-10-14 16:34:25
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chenqing7728

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
180803014(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-15 15:00:47
受体菌：供体菌：协助菌比列你为什么刚开始就用10:1:1？2:1:1？
这个的比例你是实验验证得出的结论？
受体菌：供体菌：协助菌培养的时间？
受体菌：供体菌：协助菌最好保证都是生长在对数期。
受体菌：供体菌：协助菌你离心的转速是多少？
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2楼2014-10-15 11:09:55
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180803014

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenqing7728 at 2014-10-15 11:09:55
受体菌：供体菌：协助菌比列你为什么刚开始就用10:1:1？2:1:1？
这个的比例你是实验验证得出的结论？
受体菌：供体菌：协助菌培养的时间？
受体菌：供体菌：协助菌最好保证都是生长在对数期。
受体菌：供体菌： ...

之前的师兄就用的这个比例，转速12000   时间2分钟，我是等菌长浑了就做结合的
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加油
3楼2014-10-16 11:45:58
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chenqing7728

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 180803014 at 2014-10-16 11:45:58
之前的师兄就用的这个比例，转速12000   时间2分钟，我是等菌长浑了就做结合的...

比例自己要摸索一下 寻求最佳比例。转速12000   太高了了。6000 就可以了。
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4楼2014-10-17 08:10:12
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180803014

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenqing7728 at 2014-10-17 08:10:12
比例自己要摸索一下 寻求最佳比例。转速12000   太高了了。6000 就可以了。...

一般都是做多大的比例呀，因为我们实验室也是刚做这个！是不是影响节后的最大因素就是比例和菌的生长时期
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加油
5楼2014-10-18 17:48:44
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