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180803014

新虫 (小有名气)

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[求助] 三亲结合问题已有1人参与

本人现在在做随机插入，用的是psc123这个质粒，受体菌（链霉素50ppm）：供体菌(卡那霉素50ppm)：协助菌（氯霉素35ppm）=10:1:1，第一次的时候结合的效率挺好的，从第二次开始，结合效率就很低，结合的菌长得很少，psc123在双抗平板上涂布上总长白色的小杂菌，但结合的上面没长（结合的菌与杂菌能明显分辨出来），后来换成了受体菌：供体菌：协助菌=2:1:1，结合的就直接不长了，平板上（双抗）长的都是小的杂菌，psc123的板子上也是，后来又换成了10:1:1，但是结合的还是不长，还是长满杂菌。以为是psc123不纯，可是已经纯化好多代了，就算有杂菌，难道就不结合了吗，直接把psc123在含链霉素的lb平板上划线，什么都没长，接到含链霉素的lb液体里也没长。现在准备吧链霉素的浓度提高，但不知道会不会对结合产生影响，现在好苦恼，不知道什么原因，忘大神指点一二！

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加油

1楼 2014-10-14 16:34:25

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chenqing7728

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
180803014(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-15 15:00:47

受体菌：供体菌：协助菌比列你为什么刚开始就用10:1:1？2:1:1？
这个的比例你是实验验证得出的结论？
受体菌：供体菌：协助菌培养的时间？
受体菌：供体菌：协助菌最好保证都是生长在对数期。
受体菌：供体菌：协助菌你离心的转速是多少？

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2楼2014-10-15 11:09:55

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180803014

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by chenqing7728 at 2014-10-15 11:09:55
受体菌：供体菌：协助菌比列你为什么刚开始就用10:1:1？2:1:1？
这个的比例你是实验验证得出的结论？
受体菌：供体菌：协助菌培养的时间？
受体菌：供体菌：协助菌最好保证都是生长在对数期。
受体菌：供体菌： ...

之前的师兄就用的这个比例，转速12000 时间2分钟，我是等菌长浑了就做结合的

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加油

3楼2014-10-16 11:45:58

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