应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 以基因组DNA为模板，pcr扩增到的片段与测序标准株差别很大，原因？
61/1返回列表
查看: 592  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

liumikewolf

金虫 (小有名气)

[交流] 以基因组DNA为模板，pcr扩增到的片段与测序标准株差别很大，原因？

以基因组DNA为模板，进行pcr扩增，电泳发现产物为单一的条带，大小与目地片段相当，测序发现该片段与测序标准株基因序列差别很大，原因是什么？是由于基因组本身与测序标准株有很大差别，还是pcr非特异性扩增到了错误的片段，或者是测序出了问题？该如何判断呢？主要是依据什么标准？请大家帮助！！！！！
[search]pcr[/search]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-04-29 22:50:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)
在PCR扩增中，会产生错误，但是是有限的，不同的酶出错机会不等，如果作功能一般用高保真酶。
一般测序公司的测序反应也是PCR过程，出错几率应该不会影响结果分析。
在pcr中，貌似单一条代，实际条代是混合物，是多种物质，仅仅大小一样而已。
你的问题：
在从新找标准序列，分析差距是否可以接受。
与测序公司沟通，了解他们的技术路线。
实在没有结果只好再转化，再测序，也许你会有新的发现。
赞一下 回复此楼
2楼2008-04-30 07:45:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenspringmi

银虫 (正式写手)
是说这个片段以前扩增过，现在扩增的和以前的进行比对时发现差别很大啊；还是扩增出来的序列在NCBI 上比对和你需要的片段差别很大啊
赞一下 回复此楼
3楼2008-04-30 08:02:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liumikewolf

金虫 (小有名气)
扩增出来的序列在NCBI 上比对和需要的片段差别很大
赞一下 回复此楼
4楼2008-04-30 09:04:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liumikewolf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by annwt at 2008-4-30 07:45:
在PCR扩增中，会产生错误，但是是有限的，不同的酶出错机会不等，如果作功能一般用高保真酶。
一般测序公司的测序反应也是PCR过程，出错几率应该不会影响结果分析。
在pcr中，貌似单一条代，实际条代是混合物， ...

如何确定与标准序列差距是否可以接受？identity达到多大？
赞一下 回复此楼
5楼2008-04-30 09:08:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)
如果是与NCBI上的序列有出入，那很正常，NCBI上的序列来源十分复杂，哪里的都可以登录，你在NCBI上找序列时注意一下序列的来源，多比对不同实验室来源的序列，再确定是否不同。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2008-04-30 15:35:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liumikewolf 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:07 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 03:56 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:02 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 22:39 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 20:51 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-10 20:45 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 申请环境，微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 01:29 by FChKX8meu1ds
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭