24小时热门版块排行榜    

查看: 1596  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

kaka456789

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于脱氢酶的pH和辅酶NADH的pH问题

现在正在做脱氢酶的实验。
具体的反应就是 A + NADH 生成 B + NAD+ (在脱氢酶的催化下)

脱氢酶在pH6.0 左右活性最高,可是辅酶NADH需要在pH>8.0才能稳定。

我现在用分光光度计测量NADH在460nm的荧光,如果用pH6.0的PBS的话,NADH降解的很快。
但是如果用pH8.7的Tris buffer的话,脱氢酶的活性又会很低。

有没有什么方法既能保证脱氢酶的活性又能保持NADH不会分解的很快。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weebug

版主 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kaka456789 at 2014-10-02 15:47:26
我做了pH的评价,可是NADH随着时间的增加,荧光一直在降低。说明NADH在pH7的条件下也会降解。 我查了一些资料,有的说不能使用含有磷酸盐的缓冲溶液,就是说不能用PBS。...

若是这样的话,有什么缓冲溶液可以代替PBS呢? Tris 或者HEPES.
天蓝蓝兮日头晒
5楼2014-10-03 11:40:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

kaka456789

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by weebug at 2014-10-02 15:25:24
pH=7

我做了pH的评价,可是NADH随着时间的增加,荧光一直在降低。说明NADH在pH7的条件下也会降解。 我查了一些资料,有的说不能使用含有磷酸盐的缓冲溶液,就是说不能用PBS。
3楼2014-10-02 15:47:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaka456789

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by weebug at 2014-10-03 11:40:00
若是这样的话,有什么缓冲溶液可以代替PBS呢? Tris 或者HEPES....

我试了一下pH7.2, 0.1 M的Tris-HCl,NADH还是有下降的现象。
6楼2014-10-03 14:04:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weebug

版主 (著名写手)

鱼与熊掌,下降速度没那么快的话就可以设定7.2。除非有其他的缓冲溶液。
天蓝蓝兮日头晒
7楼2014-10-04 10:34:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +3 瞬息宇宙 2026-08-10 3/150 2026-08-10 18:27 by Tide man
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见