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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 关于脱氢酶的pH和辅酶NADH的pH问题
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kaka456789

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于脱氢酶的pH和辅酶NADH的pH问题

现在正在做脱氢酶的实验。
具体的反应就是 A + NADH 生成 B + NAD+ （在脱氢酶的催化下）

脱氢酶在pH6.0 左右活性最高，可是辅酶NADH需要在pH>8.0才能稳定。

我现在用分光光度计测量NADH在460nm的荧光，如果用pH6.0的PBS的话，NADH降解的很快。
但是如果用pH8.7的Tris buffer的话，脱氢酶的活性又会很低。

有没有什么方法既能保证脱氢酶的活性又能保持NADH不会分解的很快。
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1楼 2014-10-02 11:21:07
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kaka456789

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by weebug at 2014-10-02 15:25:24
pH=7

我做了pH的评价，可是NADH随着时间的增加，荧光一直在降低。说明NADH在pH7的条件下也会降解。 我查了一些资料，有的说不能使用含有磷酸盐的缓冲溶液，就是说不能用PBS。
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3楼2014-10-02 15:47:26
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weebug

版主 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kaka456789 at 2014-10-02 15:47:26
我做了pH的评价，可是NADH随着时间的增加，荧光一直在降低。说明NADH在pH7的条件下也会降解。 我查了一些资料，有的说不能使用含有磷酸盐的缓冲溶液，就是说不能用PBS。...

若是这样的话，有什么缓冲溶液可以代替PBS呢？ Tris 或者ＨＥＰＥＳ．
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天蓝蓝兮日头晒
5楼2014-10-03 11:40:00
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kaka456789

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by weebug at 2014-10-03 11:40:00
若是这样的话，有什么缓冲溶液可以代替PBS呢？ Tris 或者ＨＥＰＥＳ．...

我试了一下pH7.2, 0.1 M的Tris-HCl,NADH还是有下降的现象。
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6楼2014-10-03 14:04:43
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weebug

版主 (著名写手)
鱼与熊掌，下降速度没那么快的话就可以设定7.2。除非有其他的缓冲溶液。
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天蓝蓝兮日头晒
7楼2014-10-04 10:34:23
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