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kaka456789

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于脱氢酶的pH和辅酶NADH的pH问题

现在正在做脱氢酶的实验。
具体的反应就是 A + NADH 生成 B + NAD+ (在脱氢酶的催化下)

脱氢酶在pH6.0 左右活性最高,可是辅酶NADH需要在pH>8.0才能稳定。

我现在用分光光度计测量NADH在460nm的荧光,如果用pH6.0的PBS的话,NADH降解的很快。
但是如果用pH8.7的Tris buffer的话,脱氢酶的活性又会很低。

有没有什么方法既能保证脱氢酶的活性又能保持NADH不会分解的很快。
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weebug

版主 (著名写手)

天蓝蓝兮日头晒
2楼2014-10-02 15:25:24
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kaka456789

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by weebug at 2014-10-02 15:25:24
pH=7

我做了pH的评价,可是NADH随着时间的增加,荧光一直在降低。说明NADH在pH7的条件下也会降解。 我查了一些资料,有的说不能使用含有磷酸盐的缓冲溶液,就是说不能用PBS。
3楼2014-10-02 15:47:26
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kaka456789

新虫 (初入文坛)

有谁知道的吗
4楼2014-10-03 09:25:55
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weebug

版主 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kaka456789 at 2014-10-02 15:47:26
我做了pH的评价,可是NADH随着时间的增加,荧光一直在降低。说明NADH在pH7的条件下也会降解。 我查了一些资料,有的说不能使用含有磷酸盐的缓冲溶液,就是说不能用PBS。...

若是这样的话,有什么缓冲溶液可以代替PBS呢? Tris 或者HEPES.
天蓝蓝兮日头晒
5楼2014-10-03 11:40:00
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kaka456789

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by weebug at 2014-10-03 11:40:00
若是这样的话,有什么缓冲溶液可以代替PBS呢? Tris 或者HEPES....

我试了一下pH7.2, 0.1 M的Tris-HCl,NADH还是有下降的现象。
6楼2014-10-03 14:04:43
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weebug

版主 (著名写手)

鱼与熊掌,下降速度没那么快的话就可以设定7.2。除非有其他的缓冲溶液。
天蓝蓝兮日头晒
7楼2014-10-04 10:34:23
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