应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 换载体，pET21a换成pET32a的酶切位点问题
52/1返回列表
查看: 3041  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

蠹鱼

木虫 (正式写手)

[求助] 换载体，pET21a换成pET32a的酶切位点问题 已有4人参与

用Nde I 和Hind III 双酶切目的片段以及空载体pET21a，构建了一个重组质粒来表达一个酶，但是至今未表达。可能是那是出现了问题呢？
        我想换个载体，用pET32试一下。Hind III 只有一个酶切位点，可以沿用。但是pET32上有2个Nde I 的切割位点，这样可以吗？会不会切的乱七八糟的？应不应该设计引物，PCR重新构建酶切位点呢？
        刚刚进实验室，恳请大家多多指点。
        另外，我还想换成pBAD质粒，这个酶切位点怎么选，怎么办？
回复此楼

» 猜你喜欢
少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。
1楼 2014-09-28 17:07:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蠹鱼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jian212 at 2014-09-29 16:50:52
恩，可以直接酶切连接的。NdeI 在同一侧，不影响的。...

您和人家回复的都不一样，更给详细的说明吗？
赞一下 回复此楼
少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。
14楼2014-09-30 08:44:36
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-28 18:49:15
蠹鱼: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-09-28 19:11:39
未表达可能原因宿主菌BL21（DE3）是否正常、诱导条件是否为最优、基因内部是否有稀有密码子。
换32a就不能用Nde I了，需要重新设计引物，酶切位点可以换成NcoI或者BamHI。另外，pBAD系列的载体酶切位点也不一样啊
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-28 18:09:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdd2008
3楼2014-09-28 18:29:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蠹鱼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cuihao102 at 2014-09-28 18:09:55
未表达可能原因宿主菌BL21（DE3）是否正常、诱导条件是否为最优、基因内部是否有稀有密码子。
换32a就不能用Nde I了，需要重新设计引物，酶切位点可以换成NcoI或者BamHI。另外，pBAD系列的载体酶切位点也不一样啊

宿主菌BL21（DE3）是正常的，没有稀有密码子。诱导条件没有做出优化。期待您的进一步回答
赞一下 回复此楼
少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。
4楼2014-09-28 19:12:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭