24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

蠹鱼

木虫 (正式写手)

应助: 34 (小学生)
金币: 1518.9
散金: 80
红花: 4
帖子: 434
在线: 147.2小时
虫号: 1397080
注册: 2011-09-10
性别: GG
专业: 化学生物学与生物有机化学

[求助] 换载体，pET21a换成pET32a的酶切位点问题已有4人参与

用Nde I 和Hind III 双酶切目的片段以及空载体pET21a，构建了一个重组质粒来表达一个酶，但是至今未表达。可能是那是出现了问题呢？
      我想换个载体，用pET32试一下。Hind III 只有一个酶切位点，可以沿用。但是pET32上有2个Nde I 的切割位点，这样可以吗？会不会切的乱七八糟的？应不应该设计引物，PCR重新构建酶切位点呢？
      刚刚进实验室，恳请大家多多指点。
      另外，我还想换成pBAD质粒，这个酶切位点怎么选，怎么办？

回复此楼

» 猜你喜欢

散金已经有68人回复
生物质超级电容器已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有82人回复
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析已经有0人回复
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点已经有0人回复
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

pET28a和pETDuet两个载体的表达强度，哪个更大？已经有16人回复
pet32a做载体，结果这一块做了三个月了还没连接成功已经有30人回复
表达载体质粒图谱（pQE30,pET32a+,pET21a,pET28a+,pET3a+, pGEX系列）已经有116人回复
关于pET32a空载分子量的问题已经有3人回复
关于pET32a载体构建后，双酶切鉴定不正确~求助已经有10人回复
利用PET-28b构建重组载体时将目的基因插在lac I基因中的酶切位点可以么已经有4人回复
用酯交换法合成PET 已经有8人回复
请教高手：转有pACYCDuet-1和pETDuet-1双载体四基因的共表达问题已经有9人回复
原核表达 pET32a和pET30a Western blot问题已经有9人回复
pET-28a载体移码突变问题已经有7人回复
急求-PET21a(+)质粒的图谱已经有5人回复
【求助/交流】关于PEt-28a质粒载体表达蛋白质的问题已经有9人回复
【求助/交流】pET-28a的酶切位点已经有6人回复
【求助/交流】那位有载体PET32a的图谱已经有5人回复

少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。

1楼 2014-09-28 17:07:55

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

蠹鱼

木虫 (正式写手)

应助: 34 (小学生)
金币: 1518.9
散金: 80
红花: 4
帖子: 434
在线: 147.2小时
虫号: 1397080
注册: 2011-09-10
性别: GG
专业: 化学生物学与生物有机化学

引用回帖:

2楼: Originally posted by cuihao102 at 2014-09-28 18:09:55
未表达可能原因宿主菌BL21（DE3）是否正常、诱导条件是否为最优、基因内部是否有稀有密码子。
换32a就不能用Nde I了，需要重新设计引物，酶切位点可以换成NcoI或者BamHI。另外，pBAD系列的载体酶切位点也不一样啊

宿主菌BL21（DE3）是正常的，没有稀有密码子。诱导条件没有做出优化。期待您的进一步回答