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离子交换过程中的困惑，算是交流吧，希望大家积极发言 已有4人参与
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我的蛋白是包涵体溶解后的变性蛋白直接用Q柱纯化，在两个盐浓度下都有目的蛋白洗脱下来（如图），我的困惑是：同一个蛋白为什么会在两个不同的盐浓度下洗脱下来？ 从电泳图上看，高浓度盐洗下来的蛋白要杂一些，会不会是这些目的蛋白和杂蛋白聚集在一起了，这样他们带的电荷要高一些，洗脱就要晚一些呢。 我的缓冲液里有8M urea和70mM 2-Me，脲的话主要是对蛋白的氢键作用，巯基乙醇是二硫键，除了这两个键以外能使蛋白聚集在一起的就剩疏水键了。如果是疏水键作用加什么东西比较好呢。阴离子型的去垢剂肯定不行，另外，低温也不太好，一是因为我用的是pH8.0 Tris-HCl缓冲液，二是因为低温下8M脲容易结晶。 这种情况不知道大家有没有遇见过，我的分析不知道对不对，希望这里的大神们可以给一些建议，讨论一下。  未命名.jpg |
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2楼2014-09-29 10:29:02
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wolfman840
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