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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化 已有8人参与

用镍柱进行蛋白纯化时，首先要获得菌体后裂解细胞，我选择的是超声破碎，我的蛋白是包涵体，但是我每次超声完后原来浑浊的菌体溶液都会变得清亮透明，离心以后几乎没有沉淀，不知道是怎么回事？难道是我超声的力度太大了，把包涵体都超声没啦？新手 请多帮忙
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1楼 2014-09-25 13:55:28
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myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
21楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-09-29 08:53:53
我做小量诱导，超声后跑胶，上清和沉淀。上清几乎没有条带，而沉淀条带却非常非常组，因此断定是包涵体。
我使用的裂解液就是用尿素 tris-base 和磷酸氢二钠配置的。你说的极端变性剂指的都是哪些呢？...

4-8M尿素，盐酸胍，sds等强变性剂。不知道你小量诱导条件与放大后表达条件是否一致?

[ 发自小木虫客户端 ]
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28楼2014-09-29 12:06:26
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putao57819

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-25 20:59:38
不确定问题在哪里。建议增加培养的菌量，降低超声强度，取超声前，超声后的菌液，离心上清和离心沉淀跑电泳来确定问题在哪里。
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2楼2014-09-25 16:40:02
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非常6+1

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-27 10:46:50
是不是超声功率太大 时间太长 即便蛋白是包涵体  菌体碎片 肯定会有离心下来的  再者是你转速太低 一般要13000rpm 30min 4℃离心 我们实验室做的话
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3楼2014-09-25 21:01:23
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winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用什么样裂解液?
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4楼2014-09-26 08:45:19
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