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张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化 已有8人参与

用镍柱进行蛋白纯化时,首先要获得菌体后裂解细胞,我选择的是超声破碎,我的蛋白是包涵体,但是我每次超声完后原来浑浊的菌体溶液都会变得清亮透明,离心以后几乎没有沉淀,不知道是怎么回事?难道是我超声的力度太大了,把包涵体都超声没啦?新手 请多帮忙
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winterb

铁杆木虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
你用什么样裂解液?
4楼2014-09-26 08:45:19
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winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

问题在你用的是尿素.不使用尿素,你可以试试.
8楼2014-09-26 09:07:08
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winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


张冰宝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-29 19:46:38
尿素溶解了包涵体 所以超声后就没有沉淀了.你可以用 50mM tris buffer 溶解细胞沉淀,再超声破碎.
10楼2014-09-26 10:17:51
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winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-27 10:47:08
通常超声的时间是45秒,超声15秒间隔15秒.  洗脱是用尿素 +咪唑梯度洗脱.
12楼2014-09-27 09:18:21
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winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你应该改变破碎方式使用高压破碎. 超声破碎只是用在少量菌液.
19楼2014-09-28 19:50:47
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winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

French Press (SLM Instruments,  Urbana,IL)
26楼2014-09-29 10:06:11
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