应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
311/4返回列表1234下一页
查看: 1440  |  回复: 30
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化 已有8人参与

用镍柱进行蛋白纯化时，首先要获得菌体后裂解细胞，我选择的是超声破碎，我的蛋白是包涵体，但是我每次超声完后原来浑浊的菌体溶液都会变得清亮透明，离心以后几乎没有沉淀，不知道是怎么回事？难道是我超声的力度太大了，把包涵体都超声没啦？新手 请多帮忙
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-09-25 13:55:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

putao57819

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-25 20:59:38
不确定问题在哪里。建议增加培养的菌量，降低超声强度，取超声前，超声后的菌液，离心上清和离心沉淀跑电泳来确定问题在哪里。
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-25 16:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

非常6+1

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-27 10:46:50
是不是超声功率太大 时间太长 即便蛋白是包涵体  菌体碎片 肯定会有离心下来的  再者是你转速太低 一般要13000rpm 30min 4℃离心 我们实验室做的话
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-25 21:01:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用什么样裂解液?
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-26 08:45:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 非常6+1 at 2014-09-25 21:01:23
是不是超声功率太大 时间太长 即便蛋白是包涵体  菌体碎片 肯定会有离心下来的  再者是你转速太低 一般要13000rpm 30min 4℃离心 我们实验室做的话

我离心用的是16000g 4度 20min 。感觉这么强是可以离会下来的。超声的强度大会把细菌裂解，也会把包涵体裂碎吗？为什么超声完都是澄清的液体呢？
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-26 08:50:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by putao57819 at 2014-09-25 16:40:02
不确定问题在哪里。建议增加培养的菌量，降低超声强度，取超声前，超声后的菌液，离心上清和离心沉淀跑电泳来确定问题在哪里。

我收集的是200ml的菌液，离心后菌液沉淀很多。超声后就没有沉淀了。
赞一下 回复此楼
6楼2014-09-26 08:51:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by winterb at 2014-09-26 08:45:19
你用什么样裂解液?

我是用的buffee B ，就是用相应的尿素，tris-cl  base和磷酸二氢钠配置的、
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-26 08:53:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

问题在你用的是尿素.不使用尿素,你可以试试.
赞一下 回复此楼
8楼2014-09-26 09:07:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by winterb at 2014-09-26 09:07:08
问题在你用的是尿素.不使用尿素,你可以试试.

我用的是默克密理博的柱子和说明书，那上面纯化的时候所用的溶液就是用尿素配的啊
你指的不用尿素，是我配置时不用尿素，还是换其他的缓冲液呢？
赞一下 回复此楼
9楼2014-09-26 09:20:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
张冰宝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-29 19:46:38
尿素溶解了包涵体 所以超声后就没有沉淀了.你可以用 50mM tris buffer 溶解细胞沉淀,再超声破碎.
赞一下 回复此楼
10楼2014-09-26 10:17:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 张冰宝 的主题更新
311/4返回列表1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 324求调剂 +9 想上学求调 2026-04-03 9/450 2026-04-04 23:57 by 果冻大王
[考研] 化学308分调剂 +23 你好明天你好 2026-03-30 24/1200 2026-04-04 18:29 by macy2011
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-04-04 5/250 2026-04-04 16:45 by cql1109
[考研] 085600，专业课化工原理，320分求调剂 +8 大馋小子 2026-03-29 8/400 2026-04-04 16:21 by dongzh2009
[考研] 348分环境工程·调剂 +10 吴彦祖24k 2026-04-03 11/550 2026-04-04 14:19 by 无际的草原
[考研] 350一志愿北京航空航天大学08500材料科学与工程求调剂 +5 kjnasfss 2026-04-03 5/250 2026-04-03 22:29 by 无际的草原
[考研] 303求调剂 +10 DLkz1314. 2026-03-30 10/500 2026-04-03 18:03 by Jimmyandyou
[考研] 考研调剂 +8 不爱喝饮料 2026-04-03 8/400 2026-04-03 16:40 by Mistake-J
[考研] 材料专硕322分 +13 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 13/650 2026-04-03 16:08 by 哦哦123
[考研] 求调剂 +3 usbdndj 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:10 by dxiaoxin
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +9 恬淡ye 2026-03-31 10/500 2026-04-03 11:10 by txp1986
[考研] 一志愿深大085601材料工程专业（专硕）300分可以调剂去哪 +8 10160315 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:36 by hypershenger
[考博] 材料工程专业硕士申博 +3 麟正宇 2026-03-30 3/150 2026-04-02 15:04 by greychen00
[考研] 08工科求调剂290分 +5 1314捧花 2026-04-02 8/400 2026-04-02 13:16 by 乔哒哒哒
[考研] 一志愿厦门大学化学工程（专硕）-数二英二406分-求调剂 +5 厦大化工 2026-04-01 5/250 2026-04-02 10:03 by jp9609
[考研] 材料调剂 +10 Eujd1 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:23 by ivanqyq
[考研] 339求调剂 +5 zjjkt 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:18 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +7 BrightLL 2026-03-29 7/350 2026-03-31 22:05 by 544594351
[考研] 物理学调剂 +4 小羊36 2026-03-30 4/200 2026-03-31 16:16 by lishahe
[考研] 一志愿大连理工大学，机械工程学硕，341 +3 西瓜田的守望者 2026-03-30 3/150 2026-03-31 11:08 by asdfzly
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭