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张冰宝

新虫 (小有名气)

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[求助] 蛋白纯化已有8人参与

用镍柱进行蛋白纯化时，首先要获得菌体后裂解细胞，我选择的是超声破碎，我的蛋白是包涵体，但是我每次超声完后原来浑浊的菌体溶液都会变得清亮透明，离心以后几乎没有沉淀，不知道是怎么回事？难道是我超声的力度太大了，把包涵体都超声没啦？新手请多帮忙

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1楼 2014-09-25 13:55:28

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myheat

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【答案】应助回帖

那说明表达在上清非包涵体。如果裂解液不含极端变性剂。

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20楼2014-09-28 20:26:33

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myheat

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【答案】应助回帖

引用回帖:

21楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-09-29 08:53:53
我做小量诱导，超声后跑胶，上清和沉淀。上清几乎没有条带，而沉淀条带却非常非常组，因此断定是包涵体。
我使用的裂解液就是用尿素 tris-base 和磷酸氢二钠配置的。你说的极端变性剂指的都是哪些呢？...

4-8M尿素，盐酸胍，sds等强变性剂。不知道你小量诱导条件与放大后表达条件是否一致?

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28楼2014-09-29 12:06:26

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