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张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化 已有8人参与

用镍柱进行蛋白纯化时,首先要获得菌体后裂解细胞,我选择的是超声破碎,我的蛋白是包涵体,但是我每次超声完后原来浑浊的菌体溶液都会变得清亮透明,离心以后几乎没有沉淀,不知道是怎么回事?难道是我超声的力度太大了,把包涵体都超声没啦?新手 请多帮忙
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chongju135

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
尿素变性溶解蛋白,如果不用尿素的话,你的蛋白还在沉淀中的
14楼2014-09-28 09:23:59
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putao57819

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-25 20:59:38
不确定问题在哪里。建议增加培养的菌量,降低超声强度,取超声前,超声后的菌液,离心上清和离心沉淀跑电泳来确定问题在哪里。
2楼2014-09-25 16:40:02
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非常6+1

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-27 10:46:50
是不是超声功率太大 时间太长 即便蛋白是包涵体  菌体碎片 肯定会有离心下来的  再者是你转速太低 一般要13000rpm 30min 4℃离心 我们实验室做的话
3楼2014-09-25 21:01:23
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winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用什么样裂解液?
4楼2014-09-26 08:45:19
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