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鬼羽帝魂木虫 (著名写手)
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荧光染料cy5.5如何用EDC和NHS活化羧基，用量是多少，活化后如何连接氨基？ 已有1人参与
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xuecsu
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2楼2014-10-10 22:44:11
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鬼羽帝魂: 金币+5, ★有帮助 2014-10-14 17:25:54
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活化部分不清楚，楼主可以在论坛上找找看，资料还挺多的。标记部分我在网上找到的，希望能够帮到楼主。 氨基封端的OLIGO可以标记CyDye SE，但是非常困难;标记前因为OILGO经氨水脱保护，请务必洗 涤掉所有的残余氨水。然后将样品真空干燥;然后溶于0.25 ml 的0.5 M NaCl 溶液中，用Sephadex G-50 脱盐，用5.0 mM borate 缓冲液平衡到pH=8.0，然后用以上硼酸缓冲液冲下OLIGO。然后浓缩至干的样 品溶于0.1 M carbonate buffer (pH 8.5-9.0);在0.5mL碳酸缓冲液中30 nmoles的OLIGO加入到CyDye SE 的玻璃瓶中室温避光，密闭搅拌反应60min。反应物经Sephadex G-50或 RP-HPLC过柱纯化，冷冻干燥 后避光保存。 注意：Oligonucleotides 和oligopeptides由于太小经常会留在过滤膜上或在冻存管内贴壁 成膜，而无法标记。 |
4楼2014-10-14 16:42:53
鬼羽帝魂
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