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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 荧光染料cy5.5如何用EDC和NHS活化羧基，用量是多少，活化后如何连接氨基？
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

[求助] 荧光染料cy5.5如何用EDC和NHS活化羧基，用量是多少，活化后如何连接氨基？ 已有1人参与

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1楼 2014-09-24 16:59:44
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xuecsu

木虫 (正式写手)

同样问题，一起吧！！！
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2楼2014-10-10 22:44:11
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuecsu at 2014-10-10 22:44:11

同样问题，一起吧！！！

嗯啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2014-10-12 19:51:56
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bucter2010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
鬼羽帝魂: 金币+5, ★有帮助 2014-10-14 17:25:54
活化部分不清楚，楼主可以在论坛上找找看，资料还挺多的。标记部分我在网上找到的，希望能够帮到楼主。
氨基封端的OLIGO可以标记CyDye SE，但是非常困难;标记前因为OILGO经氨水脱保护，请务必洗
　　涤掉所有的残余氨水。然后将样品真空干燥;然后溶于0.25 ml 的0.5 M NaCl 溶液中，用Sephadex G-50
　　脱盐，用5.0 mM borate 缓冲液平衡到pH=8.0，然后用以上硼酸缓冲液冲下OLIGO。然后浓缩至干的样
　　品溶于0.1 M carbonate buffer (pH 8.5-9.0);在0.5mL碳酸缓冲液中30 nmoles的OLIGO加入到CyDye SE
　　的玻璃瓶中室温避光，密闭搅拌反应60min。反应物经Sephadex G-50或 RP-HPLC过柱纯化，冷冻干燥
　　后避光保存。
　　注意：Oligonucleotides 和oligopeptides由于太小经常会留在过滤膜上或在冻存管内贴壁
　　成膜，而无法标记。
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学着学着就会了
4楼2014-10-14 16:42:53
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bucter2010 at 2014-10-14 16:42:53
活化部分不清楚，楼主可以在论坛上找找看，资料还挺多的。标记部分我在网上找到的，希望能够帮到楼主。
氨基封端的OLIGO可以标记CyDye SE，但是非常困难;标记前因为OILGO经氨水脱保护，请务必洗
　　涤掉所有的残 ...

谢谢。我帮我同学发的贴。@xuecsu
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5楼2014-10-14 17:26:33
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