24小时热门版块排行榜    

查看: 2041  |  回复: 10

flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质浓度测定及活性检测 已有3人参与

我纯化出来的蛋白质做两次BC A 蛋白定量,一次稀释5倍,一次稀释10倍,结果分别是4.17mg/ml,1.4mg/ml,拟合系数均在0.99以上,为什么差距会这么大呢。这下面要检测蛋白活性,不知道按照哪个算,我用了cck-8法检测细胞活性,说明书上写着,要100ul 5000个细胞,我想了解下这个怎么估计呢,难道在铺96孔板之前要把细胞悬浮,计数,然后再铺板吗?还有蛋白质稀释好后能直接放在细胞房超净台里,还是放在冰上,要不要对蛋白进行灭菌处理等,谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

璧月

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by flll2014 at 2014-09-25 20:58:49
我想问下就是再铺96孔板前细胞要长成什么情况...

我都是细胞传代时铺板。
细胞状态稳定了加药呗,长太密了药物作用容易不明显。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-09-25 21:41:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

璧月

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到bca稀释后浓度不准的情况。不过我最终是按照冻干品重量浓度算的。
我是做mtt,需要对细胞进行悬浮计数,稀释到自己要的浓度。
要做到蛋白无菌,就是0.22μm过滤,加药时在超净台内操作。我因为量很少,过滤会有损失,有时会把冻干品拿到超净台,拿灭过菌的无菌水溶解,再加药,这样不能保证完全无菌,不过比在外面溶了直接用来加药要强。
你们实验室应该有人做过的,多问问呗。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-09-24 21:50:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-24 21:50:06
我也遇到bca稀释后浓度不准的情况。不过我最终是按照冻干品重量浓度算的。
我是做mtt,需要对细胞进行悬浮计数,稀释到自己要的浓度。
要做到蛋白无菌,就是0.22μm过滤,加药时在超净台内操作。我因为量很少,过 ...

嗯,好的,谢谢啊,请问下你在做mtt 之前,细胞培养要长满培养板,还是80%左右就可以了
3楼2014-09-25 11:27:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

璧月

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by flll2014 at 2014-09-25 11:27:53
嗯,好的,谢谢啊,请问下你在做mtt 之前,细胞培养要长满培养板,还是80%左右就可以了...

为了得到明显的结果,贴壁就加药了,大概是铺板后24小时

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-09-25 19:10:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-25 19:10:31
为了得到明显的结果,贴壁就加药了,大概是铺板后24小时
...

我养的是昆虫细胞,感觉2小时就贴壁了呢
5楼2014-09-25 20:58:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-25 19:10:31
为了得到明显的结果,贴壁就加药了,大概是铺板后24小时
...

我想问下就是再铺96孔板前细胞要长成什么情况
6楼2014-09-25 20:58:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-25 21:41:46
我都是细胞传代时铺板。
细胞状态稳定了加药呗,长太密了药物作用容易不明显。
...

嗯,是的,我发现了,我做了浓度梯度,可是梯度之间没有差异,只是处理组与对照组有差异,请问下你是用什么软件处理酶标仪读出的数据呢
8楼2014-09-26 09:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

璧月

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by flll2014 at 2014-09-26 09:43:10
嗯,是的,我发现了,我做了浓度梯度,可是梯度之间没有差异,只是处理组与对照组有差异,请问下你是用什么软件处理酶标仪读出的数据呢...

刚开始做,只用了excel
9楼2014-09-26 10:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

偶尔哼哼的猪

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我测的时候也出现了稀释浓度后吸光度不准的现象,不知除了用冻干的蛋白算浓度,还用过什么方法解决这个问题?
10楼2015-10-09 16:39:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 flll2014 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:40 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +23 医学老男孩 2026-08-13 49/2450 2026-08-14 20:02 by zhaifei
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见