24小时热门版块排行榜    

查看: 2010  |  回复: 10

flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质浓度测定及活性检测 已有3人参与

我纯化出来的蛋白质做两次BC A 蛋白定量,一次稀释5倍,一次稀释10倍,结果分别是4.17mg/ml,1.4mg/ml,拟合系数均在0.99以上,为什么差距会这么大呢。这下面要检测蛋白活性,不知道按照哪个算,我用了cck-8法检测细胞活性,说明书上写着,要100ul 5000个细胞,我想了解下这个怎么估计呢,难道在铺96孔板之前要把细胞悬浮,计数,然后再铺板吗?还有蛋白质稀释好后能直接放在细胞房超净台里,还是放在冰上,要不要对蛋白进行灭菌处理等,谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

璧月

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by flll2014 at 2014-09-25 20:58:49
我想问下就是再铺96孔板前细胞要长成什么情况...

我都是细胞传代时铺板。
细胞状态稳定了加药呗,长太密了药物作用容易不明显。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-09-25 21:41:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

璧月

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到bca稀释后浓度不准的情况。不过我最终是按照冻干品重量浓度算的。
我是做mtt,需要对细胞进行悬浮计数,稀释到自己要的浓度。
要做到蛋白无菌,就是0.22μm过滤,加药时在超净台内操作。我因为量很少,过滤会有损失,有时会把冻干品拿到超净台,拿灭过菌的无菌水溶解,再加药,这样不能保证完全无菌,不过比在外面溶了直接用来加药要强。
你们实验室应该有人做过的,多问问呗。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-09-24 21:50:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-24 21:50:06
我也遇到bca稀释后浓度不准的情况。不过我最终是按照冻干品重量浓度算的。
我是做mtt,需要对细胞进行悬浮计数,稀释到自己要的浓度。
要做到蛋白无菌,就是0.22μm过滤,加药时在超净台内操作。我因为量很少,过 ...

嗯,好的,谢谢啊,请问下你在做mtt 之前,细胞培养要长满培养板,还是80%左右就可以了
3楼2014-09-25 11:27:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

璧月

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by flll2014 at 2014-09-25 11:27:53
嗯,好的,谢谢啊,请问下你在做mtt 之前,细胞培养要长满培养板,还是80%左右就可以了...

为了得到明显的结果,贴壁就加药了,大概是铺板后24小时

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-09-25 19:10:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-25 19:10:31
为了得到明显的结果,贴壁就加药了,大概是铺板后24小时
...

我养的是昆虫细胞,感觉2小时就贴壁了呢
5楼2014-09-25 20:58:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-25 19:10:31
为了得到明显的结果,贴壁就加药了,大概是铺板后24小时
...

我想问下就是再铺96孔板前细胞要长成什么情况
6楼2014-09-25 20:58:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-25 21:41:46
我都是细胞传代时铺板。
细胞状态稳定了加药呗,长太密了药物作用容易不明显。
...

嗯,是的,我发现了,我做了浓度梯度,可是梯度之间没有差异,只是处理组与对照组有差异,请问下你是用什么软件处理酶标仪读出的数据呢
8楼2014-09-26 09:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

璧月

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by flll2014 at 2014-09-26 09:43:10
嗯,是的,我发现了,我做了浓度梯度,可是梯度之间没有差异,只是处理组与对照组有差异,请问下你是用什么软件处理酶标仪读出的数据呢...

刚开始做,只用了excel
9楼2014-09-26 10:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

偶尔哼哼的猪

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我测的时候也出现了稀释浓度后吸光度不准的现象,不知除了用冻干的蛋白算浓度,还用过什么方法解决这个问题?
10楼2015-10-09 16:39:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 flll2014 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +5 yufeiwaner 2026-08-09 5/250 2026-08-10 08:15 by BlakeReary
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 14/700 2026-08-09 23:33 by Tide man
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +4 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-09 22:24 by otj2008
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +15 且听虎啸 2026-08-07 22/1100 2026-08-09 22:13 by 布布和一二
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见