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[求助]
大神们，谁用过DMMB （1.9-二甲基亚甲蓝）？？急求交流
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| 大家有谁做过DMMB染色测量黏多糖的含量的实验吗，文献上介绍地有点不统一啊，不知道怎么办了。有没有做成功的方法，借鉴一下哈！！小硕跪求了 |
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3楼2021-05-27 19:42:56
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用DMMB法测过糖胺聚糖含量。方法如下： （1）试剂配制——DMMB显色液的配制 ① pH 3.3的染色液：DMMB 10.7 mg，去离子水溶解后，用甲酸调pH至3.3，定容至1 L； ② 2 M Tris溶液：Tris 24.228 g 去离子水溶解后定容至100 mL； 使用前将上述两种溶液按10:1（V/V）的比例混合，现用现配。 （2）标曲 以硫酸软骨素（chondroitin sulfate, CS）为标准物，配制100 μg/mL的标准溶液。按下表所示得到不同浓度的标准溶液60 μL，然后依次加入1 mL DMMB显色液，室温下放置15 min。取200 μL用酶标仪检测525 nm处的吸光值。以CS浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标制作标准曲线。 表 CS标准曲线的制作 Table Method of making standard curve with chondroitin sulfate CS浓度（μg/mL） 0 16.67 33.33 50 66.67 83.33 标准液（μL） 0 10 20 30 40 50 去离子水（μL） 60 50 40 30 20 10 （3）样品中GAG含量的测定 取所得上清液60 μL，按照上述方法测定相应吸光值，带入标准曲线计算得到样液中GAG的含量。 |
2楼2021-01-07 16:44:26
