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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 活化菌提质粒碰到的奇怪问题
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

[求助] 活化菌提质粒碰到的奇怪问题 已有5人参与

我有自己构建的2个菌株A,B。
我挑单克隆后提质粒挺好的，大约300ng/ul。
但是我保存菌后的一个月后再提质粒，却是30ng/ul。

之后我重新转化质粒，挑单克隆，提质粒，大约300ng/ul。同时把这次的菌保存了。
但是我用这次保存菌后的10后再提质粒，却是20ng/ul。
同批提取的质粒很正常，400ng/ul。

求问：这是为什么呢？因为质粒太大了？还是污染了？还是别的什么原因？
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1楼 2014-09-09 14:49:43
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dulei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+1, ★有帮助 2014-09-10 15:25:50
能用就行了？要那么浓干吗？

你提取的菌液量是不是一样？菌浓是不是一样？如果这两个都一样，那你抗生素的浓度是不是够？不够的话，质粒不稳定。
大质粒（>10k），用试剂盒提出的浓度低，可以改成手提。

排除以上问题。如果是新手，严重怀疑操作上的问题。如果不是新手，根本不会有这个疑问。
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2楼2014-09-10 12:57:48
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+1, ★有帮助 2014-09-10 15:25:58
菌种需要复苏,另外菌液浓度是否一样?提取质粒的试剂盒是否一样?洗脱质粒时候洗脱液体积是否一样??如果上面的条件都不一样,提取质粒浓度不一样就很正常了!
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3楼2014-09-10 15:08:48
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dulei at 2014-09-10 12:57:48
能用就行了？要那么浓干吗？

你提取的菌液量是不是一样？菌浓是不是一样？如果这两个都一样，那你抗生素的浓度是不是够？不够的话，质粒不稳定。
大质粒（>10k），用试剂盒提出的浓度低，可以改成手提。

...

真的不是操作的问题。   我用碱裂解提的，同一批提的其他的质粒非常好，菌种都是一样的。
关键是不够用。。。我要用来做克隆。
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4楼2014-09-10 15:24:54
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-09-10 15:08:48
菌种需要复苏,另外菌液浓度是否一样?提取质粒的试剂盒是否一样?洗脱质粒时候洗脱液体积是否一样??如果上面的条件都不一样,提取质粒浓度不一样就很正常了!

我用的碱裂解，操作步骤一模一样。
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5楼2014-09-10 15:25:35
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
没人了吗   我顶一下
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6楼2014-09-11 10:16:48
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
@西门吹雪170    帮我分析一下    谢谢   最近要崩溃了
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7楼2014-09-11 10:17:44
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-09-12 09:25:28
1、你这个同批的菌液是什么，我有点不明白
2、你的载体是pMD19-T?菌种是？
3、活化菌种时可以适当摇久一点再抽质粒
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
8楼2014-09-11 15:13:34
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Merrylegs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-09-12 09:25:37
冻存的菌种最好先划线培养，然后挑取单克隆再振荡培养。如果直接用冻存菌种振荡培养，可能效果会不太好。我的经验，仅供参考。
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9楼2014-09-11 15:35:42
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刘芬玲

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+2, ★有帮助 2014-09-12 09:25:49
保存的菌种先划线活化一下，然后再摇菌提质粒，这样浓度应该不会有那么大的差异
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10楼2014-09-11 16:49:18
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