24小时热门版块排行榜    

查看: 1794  |  回复: 16

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

[求助] 活化菌提质粒碰到的奇怪问题 已有5人参与

我有自己构建的2个菌株A,B。
我挑单克隆后提质粒挺好的,大约300ng/ul。
但是我保存菌后的一个月后再提质粒,却是30ng/ul。

之后我重新转化质粒,挑单克隆,提质粒,大约300ng/ul。同时把这次的菌保存了。
但是我用这次保存菌后的10后再提质粒,却是20ng/ul。
同批提取的质粒很正常,400ng/ul。

求问:这是为什么呢?因为质粒太大了?还是污染了?还是别的什么原因?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dulei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+1, 有帮助 2014-09-10 15:25:50
能用就行了?要那么浓干吗?

你提取的菌液量是不是一样?菌浓是不是一样?如果这两个都一样,那你抗生素的浓度是不是够?不够的话,质粒不稳定。
大质粒(>10k),用试剂盒提出的浓度低,可以改成手提。

排除以上问题。如果是新手,严重怀疑操作上的问题。如果不是新手,根本不会有这个疑问。
2楼2014-09-10 12:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+1, 有帮助 2014-09-10 15:25:58
菌种需要复苏,另外菌液浓度是否一样?提取质粒的试剂盒是否一样?洗脱质粒时候洗脱液体积是否一样??如果上面的条件都不一样,提取质粒浓度不一样就很正常了!
3楼2014-09-10 15:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dulei at 2014-09-10 12:57:48
能用就行了?要那么浓干吗?

你提取的菌液量是不是一样?菌浓是不是一样?如果这两个都一样,那你抗生素的浓度是不是够?不够的话,质粒不稳定。
大质粒(>10k),用试剂盒提出的浓度低,可以改成手提。

...

真的不是操作的问题。   我用碱裂解提的,同一批提的其他的质粒非常好,菌种都是一样的。
关键是不够用。。。我要用来做克隆。
4楼2014-09-10 15:24:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-09-10 15:08:48
菌种需要复苏,另外菌液浓度是否一样?提取质粒的试剂盒是否一样?洗脱质粒时候洗脱液体积是否一样??如果上面的条件都不一样,提取质粒浓度不一样就很正常了!

我用的碱裂解,操作步骤一模一样。
5楼2014-09-10 15:25:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

没人了吗   我顶一下
6楼2014-09-11 10:16:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

@西门吹雪170    帮我分析一下    谢谢   最近要崩溃了
7楼2014-09-11 10:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-09-12 09:25:28
1、你这个同批的菌液是什么,我有点不明白
2、你的载体是pMD19-T?菌种是?
3、活化菌种时可以适当摇久一点再抽质粒
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
8楼2014-09-11 15:13:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Merrylegs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-09-12 09:25:37
冻存的菌种最好先划线培养,然后挑取单克隆再振荡培养。如果直接用冻存菌种振荡培养,可能效果会不太好。我的经验,仅供参考。
9楼2014-09-11 15:35:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘芬玲

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+2, 有帮助 2014-09-12 09:25:49
保存的菌种先划线活化一下,然后再摇菌提质粒,这样浓度应该不会有那么大的差异
10楼2014-09-11 16:49:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员fBlk6m 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-25 01:47 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见