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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 活化菌提质粒碰到的奇怪问题
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飞奔的大象

新虫 (小有名气)
完全没必要纠结这个。小抽换成大抽。有太多比这个更值得探索的问题等你去做呢。

[ 发自小木虫客户端 ]
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11楼2014-09-11 17:30:26
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 飞奔的大象 at 2014-09-11 17:30:26
完全没必要纠结这个。小抽换成大抽。有太多比这个更值得探索的问题等你去做呢。

10ml提完才有5-6ug，这不正常吧。
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12楼2014-09-12 09:19:45
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-09-11 15:13:34
1、你这个同批的菌液是什么，我有点不明白
2、你的载体是pMD19-T?菌种是？
3、活化菌种时可以适当摇久一点再抽质粒

同批的菌液是指同时摇菌提质粒的另一个菌。
菌种是大肠DH5a。
是不是因为质粒大的原因，所以提的少？因为我同时摇了2个菌，一样的条件，另一个提的很好，而这个不行。

谢谢你，百忙之中逢叫必到。
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13楼2014-09-12 09:23:03
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Merrylegs at 2014-09-11 15:35:42
冻存的菌种最好先划线培养，然后挑取单克隆再振荡培养。如果直接用冻存菌种振荡培养，可能效果会不太好。我的经验，仅供参考。

可能是这样的，我们一般都是直接用-80的直接摇菌，提质粒，量挺多的。不过这个突然量很少了，我觉得可能有什么原因我不知道的。所以里问问。
谢谢啦~~
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14楼2014-09-12 09:24:50
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 刘芬玲 at 2014-09-11 16:49:18
保存的菌种先划线活化一下，然后再摇菌提质粒，这样浓度应该不会有那么大的差异

恩   这是一个好办法
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15楼2014-09-12 09:25:12
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-09-12 09:23:03
同批的菌液是指同时摇菌提质粒的另一个菌。
菌种是大肠DH5a。
是不是因为质粒大的原因，所以提的少？因为我同时摇了2个菌，一样的条件，另一个提的很好，而这个不行。

谢谢你，百忙之中逢叫必到。...

你这个意思就是指你的质粒比较大吧？这样很有可能就要活化久一点，另外也许跟这个质粒在该菌里面稳定性不好也有关系。
其他建议如：划平板挑克隆扩大培养，是一种不错的方法，我的导师有建议我用这种方法，但是我一直嫌麻烦懒得用，你可以试试
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
16楼2014-09-12 10:36:37
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-09-12 10:36:37
你这个意思就是指你的质粒比较大吧？这样很有可能就要活化久一点，另外也许跟这个质粒在该菌里面稳定性不好也有关系。
其他建议如：划平板挑克隆扩大培养，是一种不错的方法，我的导师有建议我用这种方法，但是我 ...

恩    我重新转化了一次   thanks
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17楼2014-09-12 11:13:17
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