应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 活化菌提质粒碰到的奇怪问题
52/1返回列表
查看: 1549  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

[求助] 活化菌提质粒碰到的奇怪问题 已有5人参与

我有自己构建的2个菌株A,B。
我挑单克隆后提质粒挺好的，大约300ng/ul。
但是我保存菌后的一个月后再提质粒，却是30ng/ul。

之后我重新转化质粒，挑单克隆，提质粒，大约300ng/ul。同时把这次的菌保存了。
但是我用这次保存菌后的10后再提质粒，却是20ng/ul。
同批提取的质粒很正常，400ng/ul。

求问：这是为什么呢？因为质粒太大了？还是污染了？还是别的什么原因？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-09-09 14:49:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-09-12 09:23:03
同批的菌液是指同时摇菌提质粒的另一个菌。
菌种是大肠DH5a。
是不是因为质粒大的原因，所以提的少？因为我同时摇了2个菌，一样的条件，另一个提的很好，而这个不行。

谢谢你，百忙之中逢叫必到。...

你这个意思就是指你的质粒比较大吧？这样很有可能就要活化久一点，另外也许跟这个质粒在该菌里面稳定性不好也有关系。
其他建议如：划平板挑克隆扩大培养，是一种不错的方法，我的导师有建议我用这种方法，但是我一直嫌麻烦懒得用，你可以试试
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
16楼2014-09-12 10:36:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

dulei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+1, ★有帮助 2014-09-10 15:25:50
能用就行了？要那么浓干吗？

你提取的菌液量是不是一样？菌浓是不是一样？如果这两个都一样，那你抗生素的浓度是不是够？不够的话，质粒不稳定。
大质粒（>10k），用试剂盒提出的浓度低，可以改成手提。

排除以上问题。如果是新手，严重怀疑操作上的问题。如果不是新手，根本不会有这个疑问。
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-10 12:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+1, ★有帮助 2014-09-10 15:25:58
菌种需要复苏,另外菌液浓度是否一样?提取质粒的试剂盒是否一样?洗脱质粒时候洗脱液体积是否一样??如果上面的条件都不一样,提取质粒浓度不一样就很正常了!
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-10 15:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dulei at 2014-09-10 12:57:48
能用就行了？要那么浓干吗？

你提取的菌液量是不是一样？菌浓是不是一样？如果这两个都一样，那你抗生素的浓度是不是够？不够的话，质粒不稳定。
大质粒（>10k），用试剂盒提出的浓度低，可以改成手提。

...

真的不是操作的问题。   我用碱裂解提的，同一批提的其他的质粒非常好，菌种都是一样的。
关键是不够用。。。我要用来做克隆。
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-10 15:24:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 299求调剂 +5 某某某某位 2026-03-21 5/250 2026-03-23 23:36 by 热情沙漠
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 生物学学硕求调剂 +4 小羊睡着了? 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:42 by hyzs6688
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 4/200 2026-03-23 20:48 by god_tian
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +5 jiajunX 2026-03-22 5/250 2026-03-23 18:07 by YMU施老师
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 材料与化工考研调剂 +4 孅華 2026-03-22 4/200 2026-03-23 16:13 by 一休哥FU
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 354求调剂 +7 Tyoumou 2026-03-18 10/500 2026-03-22 11:11 by 人来盛
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭