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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 活化菌提质粒碰到的奇怪问题
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

[求助] 活化菌提质粒碰到的奇怪问题 已有5人参与

我有自己构建的2个菌株A,B。
我挑单克隆后提质粒挺好的，大约300ng/ul。
但是我保存菌后的一个月后再提质粒，却是30ng/ul。

之后我重新转化质粒，挑单克隆，提质粒，大约300ng/ul。同时把这次的菌保存了。
但是我用这次保存菌后的10后再提质粒，却是20ng/ul。
同批提取的质粒很正常，400ng/ul。

求问：这是为什么呢？因为质粒太大了？还是污染了？还是别的什么原因？
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1楼 2014-09-09 14:49:43
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-09-12 09:23:03
同批的菌液是指同时摇菌提质粒的另一个菌。
菌种是大肠DH5a。
是不是因为质粒大的原因，所以提的少？因为我同时摇了2个菌，一样的条件，另一个提的很好，而这个不行。

谢谢你，百忙之中逢叫必到。...

你这个意思就是指你的质粒比较大吧？这样很有可能就要活化久一点，另外也许跟这个质粒在该菌里面稳定性不好也有关系。
其他建议如：划平板挑克隆扩大培养，是一种不错的方法，我的导师有建议我用这种方法，但是我一直嫌麻烦懒得用，你可以试试
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
16楼2014-09-12 10:36:37
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dulei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+1, ★有帮助 2014-09-10 15:25:50
能用就行了？要那么浓干吗？

你提取的菌液量是不是一样？菌浓是不是一样？如果这两个都一样，那你抗生素的浓度是不是够？不够的话，质粒不稳定。
大质粒（>10k），用试剂盒提出的浓度低，可以改成手提。

排除以上问题。如果是新手，严重怀疑操作上的问题。如果不是新手，根本不会有这个疑问。
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2楼2014-09-10 12:57:48
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+1, ★有帮助 2014-09-10 15:25:58
菌种需要复苏,另外菌液浓度是否一样?提取质粒的试剂盒是否一样?洗脱质粒时候洗脱液体积是否一样??如果上面的条件都不一样,提取质粒浓度不一样就很正常了!
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3楼2014-09-10 15:08:48
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dulei at 2014-09-10 12:57:48
能用就行了？要那么浓干吗？

你提取的菌液量是不是一样？菌浓是不是一样？如果这两个都一样，那你抗生素的浓度是不是够？不够的话，质粒不稳定。
大质粒（>10k），用试剂盒提出的浓度低，可以改成手提。

...

真的不是操作的问题。   我用碱裂解提的，同一批提的其他的质粒非常好，菌种都是一样的。
关键是不够用。。。我要用来做克隆。
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4楼2014-09-10 15:24:54
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