应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 活化菌提质粒碰到的奇怪问题
51/1返回列表
查看: 1544  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

[求助] 活化菌提质粒碰到的奇怪问题 已有5人参与

我有自己构建的2个菌株A,B。
我挑单克隆后提质粒挺好的，大约300ng/ul。
但是我保存菌后的一个月后再提质粒，却是30ng/ul。

之后我重新转化质粒，挑单克隆，提质粒，大约300ng/ul。同时把这次的菌保存了。
但是我用这次保存菌后的10后再提质粒，却是20ng/ul。
同批提取的质粒很正常，400ng/ul。

求问：这是为什么呢？因为质粒太大了？还是污染了？还是别的什么原因？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-09-09 14:49:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Merrylegs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-09-12 09:25:37
冻存的菌种最好先划线培养，然后挑取单克隆再振荡培养。如果直接用冻存菌种振荡培养，可能效果会不太好。我的经验，仅供参考。
赞一下 回复此楼
9楼2014-09-11 15:35:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

dulei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+1, ★有帮助 2014-09-10 15:25:50
能用就行了？要那么浓干吗？

你提取的菌液量是不是一样？菌浓是不是一样？如果这两个都一样，那你抗生素的浓度是不是够？不够的话，质粒不稳定。
大质粒（>10k），用试剂盒提出的浓度低，可以改成手提。

排除以上问题。如果是新手，严重怀疑操作上的问题。如果不是新手，根本不会有这个疑问。
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-10 12:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+1, ★有帮助 2014-09-10 15:25:58
菌种需要复苏,另外菌液浓度是否一样?提取质粒的试剂盒是否一样?洗脱质粒时候洗脱液体积是否一样??如果上面的条件都不一样,提取质粒浓度不一样就很正常了!
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-10 15:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dulei at 2014-09-10 12:57:48
能用就行了？要那么浓干吗？

你提取的菌液量是不是一样？菌浓是不是一样？如果这两个都一样，那你抗生素的浓度是不是够？不够的话，质粒不稳定。
大质粒（>10k），用试剂盒提出的浓度低，可以改成手提。

...

真的不是操作的问题。   我用碱裂解提的，同一批提的其他的质粒非常好，菌种都是一样的。
关键是不够用。。。我要用来做克隆。
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-10 15:24:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 07化学280分求调剂 +4 722865 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:01 by chixmc
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 11/550 2026-03-23 23:29 by 呆呆师姐
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +4 kotoko_ik 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:23 by 呆呆师姐
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +4 cccchenso 2026-03-23 4/200 2026-03-23 23:00 by 徐ckkk
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭