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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 胶回收时跑不出条带
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白话八股

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果二???体??多?????胶回收，直接纯化

[ ????С??????? ]
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最爱的那个人会出现在身边。
61楼2014-09-11 12:39:21
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主  把所有帖子看完，才大概明白了你的意思
跑了4ul是有条带，而且很好。再跑40ul的就没有条带，所以根本也没有胶回收。
还有一点不明白的是你PCR体系是20ul，是做了几管，混合后跑胶的吗？
这个实验不难，与其纠结，不如再做一遍，建议扩大体系做，或者还是以前体系做了，先混合好，再跑胶看结果。
祝你顺利！
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62楼2014-09-11 13:15:58
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根本停不下
63楼2014-09-12 19:16:43
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childchou

银虫 (小有名气)
引用回帖:
62楼: Originally posted by happydove at 2014-09-11 13:15:58
楼主  把所有帖子看完，才大概明白了你的意思
跑了4ul是有条带，而且很好。再跑40ul的就没有条带，所以根本也没有胶回收。
还有一点不明白的是你PCR体系是20ul，是做了几管，混合后跑胶的吗？
这个实验不难，与其 ...

对的，20ul体系，5管，有混合跑胶也有单个管单独加一个孔跑胶，后面PCR多试了几次后发现其实都能看到目的条带，但是亮度很弱，反而是在200,300.400bp处出现了很亮的条带，不是指一个胶道里同时出现，是第一个出现200，第二个可能就是300bp的，我跑的8个孔，就都是这样的。是不是引物的特异性不好？cDNA模板我也有稀释过再P，
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boomshakalaka
64楼2014-09-14 09:16:32
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happydove

新虫 (小有名气)
引用回帖:
64楼: Originally posted by childchou at 2014-09-14 09:16:32
对的，20ul体系，5管，有混合跑胶也有单个管单独加一个孔跑胶，后面PCR多试了几次后发现其实都能看到目的条带，但是亮度很弱，反而是在200,300.400bp处出现了很亮的条带，不是指一个胶道里同时出现，是第一个出现2 ...

嗯  照你这么说  估计是引物特异性不好  你模板是cDNA？我建议最好是有内参  这样就知道具体是什么问题了
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65楼2014-09-15 16:18:20
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childchou

银虫 (小有名气)
引用回帖:
65楼: Originally posted by happydove at 2014-09-15 16:18:20
嗯  照你这么说  估计是引物特异性不好  你模板是cDNA？我建议最好是有内参  这样就知道具体是什么问题了...

模板是cDNA，嗯，试试吧，每次都忘了加内参的....
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boomshakalaka
66楼2014-09-15 19:41:04
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