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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 胶回收时跑不出条带
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childchou

银虫 (小有名气)

[求助] 胶回收时跑不出条带 已有18人参与

小弟做基因克隆，PCR后跑电泳观察，上样量4ul，跑出的条带很亮，而且片段大小正确1000bp，然后进行胶回收，把4管PCR产物混一起，每个胶孔上样40ul，跑电泳后发现目的片段处没有条带，反而在100-200bp大小处出现很亮的条带，应该是引物二聚体，想请教下各位大神，这是为什么呀！用的染料是goldview，胶染法。急急急急急！！！！！
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boomshakalaka
1楼 2014-09-07 20:58:10
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childchou

银虫 (小有名气)
引用回帖:
62楼: Originally posted by happydove at 2014-09-11 13:15:58
楼主  把所有帖子看完，才大概明白了你的意思
跑了4ul是有条带，而且很好。再跑40ul的就没有条带，所以根本也没有胶回收。
还有一点不明白的是你PCR体系是20ul，是做了几管，混合后跑胶的吗？
这个实验不难，与其 ...

对的，20ul体系，5管，有混合跑胶也有单个管单独加一个孔跑胶，后面PCR多试了几次后发现其实都能看到目的条带，但是亮度很弱，反而是在200,300.400bp处出现了很亮的条带，不是指一个胶道里同时出现，是第一个出现200，第二个可能就是300bp的，我跑的8个孔，就都是这样的。是不是引物的特异性不好？cDNA模板我也有稀释过再P，
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boomshakalaka
64楼2014-09-14 09:16:32
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tangjiguoice

木虫 (著名写手)
★
childchou(金币+1): 谢谢参与
得金币了，说声谢谢！
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2楼2014-09-07 21:09:20
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childchou

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tangjiguoice at 2014-09-07 21:09:20
得金币了，说声谢谢！

给点建议啊！亲
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boomshakalaka
3楼2014-09-07 21:18:27
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人偶骑士

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-08 16:19:12
换EB试试，我之前用其它染色剂也出现了很多问题，换了EB就没了
赞一下 回复此楼
道之所在，虽千万人吾往矣！
5楼2014-09-07 21:27:07
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