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childchou

银虫 (小有名气)

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[求助] 胶回收时跑不出条带已有18人参与

小弟做基因克隆，PCR后跑电泳观察，上样量4ul，跑出的条带很亮，而且片段大小正确1000bp，然后进行胶回收，把4管PCR产物混一起，每个胶孔上样40ul，跑电泳后发现目的片段处没有条带，反而在100-200bp大小处出现很亮的条带，应该是引物二聚体，想请教下各位大神，这是为什么呀！用的染料是goldview，胶染法。急急急急急！！！！！

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boomshakalaka

1楼 2014-09-07 20:58:10

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childchou

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

62楼: Originally posted by happydove at 2014-09-11 13:15:58
楼主把所有帖子看完，才大概明白了你的意思
跑了4ul是有条带，而且很好。再跑40ul的就没有条带，所以根本也没有胶回收。
还有一点不明白的是你PCR体系是20ul，是做了几管，混合后跑胶的吗？
这个实验不难，与其 ...

对的，20ul体系，5管，有混合跑胶也有单个管单独加一个孔跑胶，后面PCR多试了几次后发现其实都能看到目的条带，但是亮度很弱，反而是在200,300.400bp处出现了很亮的条带，不是指一个胶道里同时出现，是第一个出现200，第二个可能就是300bp的，我跑的8个孔，就都是这样的。是不是引物的特异性不好？cDNA模板我也有稀释过再P，