应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 琼脂糖凝胶上回收PCR产物
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
171/2返回列表12下一页
查看: 947  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

190582353

木虫 (小有名气)

[交流] 求助 琼脂糖凝胶上回收PCR产物

用PCR产物回收试剂盒尝试从琼脂糖凝胶上回收PCR 产物，但每次用回收的溶液再次电泳都得不到条带，我用的是无菌水洗脱，时间为20分钟，洗脱前55度预热， 同时尝试过TE（PH约为8）仍然得不到条带。哪位高手做过类似的实验，请赐教，不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2008-04-18 15:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
可能是量少吧，电泳的时候检测不到。试剂盒回收按照提供的步骤一般问题不大的。
赞一下 回复此楼
活着就要让人感受到你的存在。
2楼2008-04-18 15:21:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guo1983752

银虫 (初入文坛)
你用的什么试剂盒啊？
一般的试剂盒都配有洗脱液啊！我从来都是用专门的洗脱液
赞一下 回复此楼
3楼2008-04-18 15:47:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hfztim

至尊木虫 (正式写手)
★ ★ ★
asr(金币+3,VIP+0):谢谢,辛苦了。欢迎常来 :-)
可能的原因：1.你的琼脂糖凝胶溶化了吗？一般要溶个10分钟左右。
2.洗脱时用的水量是不是太多？一般用20ul就可以了。
3.回收的溶液再次电泳时取了几微升上样？一般要5ul左右。
另外PCR产物一般情况下不需要琼脂糖凝胶回收的，你可以按这个方法做：
1.PCR产物转移至1.5ml离心管，加TE至400ul，加2倍乙醇和1/10乙酸钠，12000rpm 5m
2.75%乙醇洗涤，加TE溶解即可。
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-04-18 17:39:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenspringmi

银虫 (正式写手)
两点建议：
1、把说明书再仔细研究一下，确定每一步都没有疑问了再做
2、回收的过程保证干净、无污染
    回收很少会出问题的，即使有问题也是很容易就可以找到原因的，不会浪费较多的时间，加油哦！
赞一下 回复此楼
5楼2008-04-18 19:03:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
用水或者专门的buffer都是一样的，专用的buffer里面有一些影响后面实验的因素存在。胶回收是个很常规的实验，做不出来应该在试剂盒或者操作上面。仔细研究夏过程，有可能出问题的环节：
1、胶的溶解是否彻底
2、wash buffer里面是否加了乙醇
常规实验。。。。。。残念。
赞一下 回复此楼
For my life！
6楼2008-04-18 22:05:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

figo.339

木虫 (著名写手)
应该是你的条带太弱了。
还有就是最后加TE或无菌水洗脱时量多了，因为一般的试剂盒都是没有问题的。
建议你在看看试剂盒上的说明书，还有就是加70%乙醇离心后时要放置2分钟再加洗脱液。
点样时量加大些，有时回收的浓度小点样是跑的不明显！
赞一下 回复此楼
7楼2008-04-19 09:49:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiyue

个人一点建议

我也遇到过上述问题,用的是Takara回收试剂盒,回收不到。后来直接将PCR产物与质粒连接，菌落培养， PCR检测出带有目的条带的菌落，进行测序，就OK了。
赞一下 回复此楼
8楼2008-04-21 11:25:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧
是不是是不是量少啊
赞一下 回复此楼
____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
9楼2008-04-21 11:34:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧
我来学习一下
回复此楼
____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
10楼2008-04-21 11:35:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 190582353 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京理工大学本科211材料工程294求调剂 +6 mikasa的围巾 2026-03-28 6/300 2026-03-29 01:32 by fmesaito
[考研] 2026年华南师范大学欢迎化学，化工，生物，生医工等专业优秀学子加入！ +3 llss0711 2026-03-28 5/250 2026-03-29 00:23 by MRMFYTL
[考研] 0703本科郑州大学求调剂 +3 nhj_ 2026-03-25 3/150 2026-03-28 13:24 by Iveryant
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-24 4/200 2026-03-28 13:17 by 唐沐儿
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-03-27 9/450 2026-03-28 12:22 by zllcz
[考研] 材料277求调剂 +7 min3 2026-03-24 7/350 2026-03-28 11:39 by xuxiang
[考研] 求调剂 +8 张zz111 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:41 by fmesaito
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 284求调剂 +11 junqihahaha 2026-03-26 12/600 2026-03-27 04:37 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭