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lyf841025

银虫 (小有名气)

不是每次回收都能得到结果,试剂盒都有回收率的问题,不是100%。你可以直接用PCR产物连接载体,然后筛选阳性克隆,进行测序!
11楼2008-04-21 12:41:56
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superwheat

银虫 (正式写手)

你用的什么公司的kit?
个人觉得TAKARA的不太好,华舜,博大泰克,天根的还不错
或者另外在漂洗液里面,是不是记得加乙醇了?

另外,你的PCR条带有多大?

[ Last edited by superwheat on 2008-4-21 at 13:21 ]
12楼2008-04-21 13:20:10
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

洗脱前55度预热,有些试剂盒加热完了以后,需要溶液冷却了再上柱子,否则目的条带就挂不上柱子.直接过滤掉了.还有个原因看看你的洗脱液加无水乙醇没.
13楼2008-04-21 20:07:17
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njlf1258

回收的得率只要大概30%。
14楼2008-04-22 09:01:16
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liumikewolf

金虫 (小有名气)

胶回收时,你的上样量是多少?样品浓度是多少?
15楼2008-04-22 16:21:11
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190582353

木虫 (小有名气)

谢谢各位,我用的是宝生物公司的试剂盒,PCR产物大约200bp,确实是按照说明书的操作,还有什么提高回收率的方法吗?
16楼2008-04-24 08:36:43
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playboy723

金虫 (正式写手)

胶溶后加200异丙醇再回收
最后一步洗脱时少加水  30微升足矣   静置5分钟后离心   检样时多上些样
17楼2008-04-24 12:07:59
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