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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 琼脂糖凝胶上回收PCR产物
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lyf841025

银虫 (小有名气)
不是每次回收都能得到结果，试剂盒都有回收率的问题，不是100%。你可以直接用PCR产物连接载体，然后筛选阳性克隆，进行测序！
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11楼2008-04-21 12:41:56
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superwheat

银虫 (正式写手)
你用的什么公司的kit?
个人觉得TAKARA的不太好，华舜，博大泰克，天根的还不错
或者另外在漂洗液里面，是不是记得加乙醇了？

另外，你的PCR条带有多大？

[ Last edited by superwheat on 2008-4-21 at 13:21 ]
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12楼2008-04-21 13:20:10
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
洗脱前55度预热，有些试剂盒加热完了以后，需要溶液冷却了再上柱子，否则目的条带就挂不上柱子．直接过滤掉了．还有个原因看看你的洗脱液加无水乙醇没．
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13楼2008-04-21 20:07:17
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njlf1258

回收的得率只要大概30％。
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14楼2008-04-22 09:01:16
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liumikewolf

金虫 (小有名气)
胶回收时，你的上样量是多少？样品浓度是多少？
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15楼2008-04-22 16:21:11
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190582353

木虫 (小有名气)
谢谢各位，我用的是宝生物公司的试剂盒，PCR产物大约200bp，确实是按照说明书的操作，还有什么提高回收率的方法吗？
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16楼2008-04-24 08:36:43
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playboy723

金虫 (正式写手)
胶溶后加200异丙醇再回收
最后一步洗脱时少加水  30微升足矣   静置5分钟后离心   检样时多上些样
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17楼2008-04-24 12:07:59
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