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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 琼脂糖凝胶上回收PCR产物
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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190582353

木虫 (小有名气)

[交流] 求助 琼脂糖凝胶上回收PCR产物

用PCR产物回收试剂盒尝试从琼脂糖凝胶上回收PCR 产物，但每次用回收的溶液再次电泳都得不到条带，我用的是无菌水洗脱，时间为20分钟，洗脱前55度预热， 同时尝试过TE（PH约为8）仍然得不到条带。哪位高手做过类似的实验，请赐教，不胜感激！
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1楼 2008-04-18 15:15:41
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weiyue

个人一点建议

我也遇到过上述问题,用的是Takara回收试剂盒,回收不到。后来直接将PCR产物与质粒连接，菌落培养， PCR检测出带有目的条带的菌落，进行测序，就OK了。
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8楼2008-04-21 11:25:03
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查看全部 17 个回答

xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
可能是量少吧，电泳的时候检测不到。试剂盒回收按照提供的步骤一般问题不大的。
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活着就要让人感受到你的存在。
2楼2008-04-18 15:21:21
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guo1983752

银虫 (初入文坛)
你用的什么试剂盒啊？
一般的试剂盒都配有洗脱液啊！我从来都是用专门的洗脱液
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3楼2008-04-18 15:47:02
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hfztim

至尊木虫 (正式写手)
★ ★ ★
asr(金币+3,VIP+0):谢谢,辛苦了。欢迎常来 :-)
可能的原因：1.你的琼脂糖凝胶溶化了吗？一般要溶个10分钟左右。
2.洗脱时用的水量是不是太多？一般用20ul就可以了。
3.回收的溶液再次电泳时取了几微升上样？一般要5ul左右。
另外PCR产物一般情况下不需要琼脂糖凝胶回收的，你可以按这个方法做：
1.PCR产物转移至1.5ml离心管，加TE至400ul，加2倍乙醇和1/10乙酸钠，12000rpm 5m
2.75%乙醇洗涤，加TE溶解即可。
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4楼2008-04-18 17:39:46
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