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liudaying

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位做过清除自由基实验的大神 已有1人参与

我的样品是用60%乙醇提取液,采用的清除自由基的方法是邻苯三酚法清除超氧阴离子自由基,脱氧核糖法清除羟自由基,硫氰酸铁法抗亚油酸氧化实验三种。
我有两个疑问:
1、为什么我的60%乙醇提取液加入到几种方法的缓冲溶液(pH7.0磷酸钠盐缓冲液,pH8.2的Tris-HCI缓冲液)中会出现乳状浑浊?出现这种情况应该怎么处理,离心吗?
2、对于我的样品而言,是应该用60%乙醇溶液作为空白对照,还是用蒸馏水或者缓冲液就可以呢?为什么我用60%乙醇溶液作为空白对照,发现跟加入缓冲溶液相比,乙醇溶液也有一定的清除自由基能力呢?这种现象正常吗
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小毛孩24

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【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
liudaying: 金币+30, ★★★★★最佳答案 2014-08-31 15:08:21
dachun263031: 食品EPI+1, 辛苦 2014-08-31 20:16:45
1、浑浊可能是无机盐在乙醇溶液中溶解度比较低,有析出,建议降低乙醇提取液的量(用水稀释),还可以把缓冲液的浓度调低一点。
2、空白对照应该用相同浓度的乙醇。乙醇有羟基,体外实验中有自由基清除活性也不奇怪。还是建议用水稀释样品溶液,或者旋干用水复溶。

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2楼2014-08-31 11:11:44
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liudaying

新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by 小毛孩24 at 2014-08-31 11:11:44
1、浑浊可能是无机盐在乙醇溶液中溶解度比较低,有析出,建议降低乙醇提取液的量(用水稀释),还可以把缓冲液的浓度调低一点。
2、空白对照应该用相同浓度的乙醇。乙醇有羟基,体外实验中有自由基清除活性也不奇怪 ...

谢谢!菜鸟表示很受启发。请问一下,用60%乙醇提取液旋干或者冻干之后会不会水溶性差,用水复溶效果不佳呢
3楼2014-08-31 15:18:41
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小毛孩24

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3楼: Originally posted by liudaying at 2014-08-31 15:18:41
谢谢!菜鸟表示很受启发。请问一下,用60%乙醇提取液旋干或者冻干之后会不会水溶性差,用水复溶效果不佳呢...

醇提物一般分子量比较小,如果极性大的话水溶性一般比较好。
不过具体问题具体对待,可以先试试看。

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4楼2014-08-31 21:24:17
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liudaying

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4楼: Originally posted by 小毛孩24 at 2014-08-31 21:24:17
醇提物一般分子量比较小,如果极性大的话水溶性一般比较好。
不过具体问题具体对待,可以先试试看。...

哦 好的!万分感谢。另外,我看国外有文献是先用60%乙醇提取,然后将滤渣用50%异丙醇提取,以您的经验来看,用这两种醇分别提取用意何在呢?是异丙醇提取出来的分子量会大一些吗?期待您的回复
5楼2014-09-01 08:41:12
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小毛孩24

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5楼: Originally posted by liudaying at 2014-09-01 08:41:12
哦 好的!万分感谢。另外,我看国外有文献是先用60%乙醇提取,然后将滤渣用50%异丙醇提取,以您的经验来看,用这两种醇分别提取用意何在呢?是异丙醇提取出来的分子量会大一些吗?期待您的回复...

对不起,上次说的不全面,醇溶蛋白也可以溶解在乙醇溶液里。
结构上,异丙醇的极性应该是比乙醇还小一点吧。

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6楼2014-09-01 09:00:10
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liudaying

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6楼: Originally posted by 小毛孩24 at 2014-09-01 09:00:10
对不起,上次说的不全面,醇溶蛋白也可以溶解在乙醇溶液里。
结构上,异丙醇的极性应该是比乙醇还小一点吧。...

恩 您的意思是提取液中的醇溶蛋白遇到盐溶液发生了盐析现象?我昨天按照你的建议稀释了一下,发现稀释四五倍的时候溶液就相对澄清了,只是我担心稀释之后清除自由基能力会不会很弱 今天试着测一下
7楼2014-09-01 10:04:26
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小毛孩24

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7楼: Originally posted by liudaying at 2014-09-01 10:04:26
恩 您的意思是提取液中的醇溶蛋白遇到盐溶液发生了盐析现象?我昨天按照你的建议稀释了一下,发现稀释四五倍的时候溶液就相对澄清了,只是我担心稀释之后清除自由基能力会不会很弱 今天试着测一下...

我之前的意思是猜测是缓冲液里的盐遇到醇析出了;
乙醇提取物中可能会有大分子的醇溶蛋白;
乙醇提取物可以先测一下DPPH
你提取的是什么东西?测定抗氧化的时候乙醇溶液和水溶液的比例是多少?缓冲液浓度?
8楼2014-09-01 10:14:47
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liudaying

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8楼: Originally posted by 小毛孩24 at 2014-09-01 10:14:47
我之前的意思是猜测是缓冲液里的盐遇到醇析出了;
乙醇提取物中可能会有大分子的醇溶蛋白;
乙醇提取物可以先测一下DPPH
你提取的是什么东西?测定抗氧化的时候乙醇溶液和水溶液的比例是多少?缓冲液浓度?...

可能两方面原因都有吧 我做的是油炸面制品脱脂之后醇提其中的美拉德反应产物 分析它的抗氧化性 提取用的是60%乙醇溶液 之前没有稀释直接进行测定 昨天预实验稀释了四五倍就相对澄清了 缓冲溶液是50mM和0.1M的
9楼2014-09-01 10:25:56
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清城微光

新虫 (初入文坛)

请问您最后是怎么解决的?是稀释吗?

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10楼2019-04-16 23:26:35
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